| الملخص Abstract |
|
تكمن أهمية فصل ومقايسة بعض الأدوية النفسية في المصل بشكل متواقت بطريقة الاستشراب السائل الرفيع الإنجاز HPLC بالطور العكوس، ومتحري UV، وموجة طولها 240 نم. تم استخدام شروط تجريبية سهلة تعتمد على طور متحرك وحيد مكون من المزيج التالي: دارئة فسفات 15 ميلي مول/ ميثانول/ اسيتونتريل/ تري ايثيل أمين ح/ح: 62.25 / 21.0 / 16.5 / 0.25.
مزج الطور المتحرك حجم/ حجم، تم إجراء طرد للغاز وضبط الـ pH بواسطة HCl (1 M) وصولاً إلى 3.5، الطور الثابت المكون من أوكتاديسيل والطور العكوس (Nucleosil C 18, 150 x 4.6 mm I.D., 5 mm) مجهز بعمود حماية Guard column. تم اتباع طرق استخلاص تعتمد على فصل العينات من المصل باستخدام تقنية انتقائية تعتمد على استخلاص خاصة بالنسبة للسوائل الحيوية (المصل) من نمط صلب/ سائل (SEP) وكانت نسبة الاسترداد تتراوح بين 90–97% أو سائل / سائل (SLL) وكانت نسبة الاسترداد تتراوح بين 80– 90% بعد المحافظة على التوازن المحب للدسم lipophilic - المحب للماء hydrophilic، وقد اتسمت كلاً من هذه الطرق بأنها حساسة ودقيقة اعتماداً على الدراسة الكمية والكيفية، حيث كان معامل التقهقر correlation coefficient للعديد من الأدوية المدروسة يتراوح بين 0.9985 – 0.9998 ومعامل الاختلاف Coefficient of variation يقع بين 0.35% - 1.20% وحد الكشف limit of quantitation يقع بين 12 - 54 نغ / مل. طبقت هذه الدراسة على مصل مرضى يتناولون أدوية صرع متنوعة أو نفسية أو من خلال طرق مزج خاصة للمادة الفعالة مع مصول حضرت لهذه الغاية ومضبوطة إلى شواهد معيارية عالمية. أع
طت هذه الطريقة نتائج جيدة ودقيقة تفيد مراكز التوافر الحيوي ومكافحة التسمم ومخابر التحاليل الطبية.
|
The importance of the separation and determination of some psychiatric drugs were done in serum by high-performance liquid chromatography reverse phase with UV detection (240 nm), Samples extracted by tow methods solid-phase and liquid phase. The extraction of the analytes from plasma samples was carried out by means of a selective solid-phase extraction procedure using hydrophilic-lipophilic. balance cartridges. The separation was obtained on a reversed-phase column (Nucleosil C 18, 150 x 4.6 mm I.D., 5 mm) using a mobile phase as: 15 mM phosphate buffer, Methanol, Acetonitrile, Triethylamine (62 .25, 21.0, 6.5, 0.25 v/v mixture, brought to pH* 3.5 with 1 M HCl. The detector was set at 240 nm.
Our method is simple and sensitive, based on qualitative and quantitative studies, The extraction yield values by SEP were 90-97% and values by SLL 80-90% for all analytes and the precision, expressed by the RSD%, was in the low percentage range. For the entire method, including sample pre-treatment and HPLC determination, the linearity of the calibration lines, expressed by the linear correlation coefficient, was 0.9985-0.9998 and Coefficient of variation was between 0.35-1.20% and the limit of quantitation was 12-54 ng/ml.
Consequently our results and our method was applied to plasma samples from patients undergoing chronic treatment with antiepileptic and psychiatric drugs, in monotherapy and in polytherapy. Based on the analytical parameters precision, accuracy, limit of quantitation and analysis time the method is suitable for routine application in therapeutic drug monitoring and the poisoning control centers and in medical laboratories.
Key Word: HPLC, anticonvulsant, antiepileptic, Carbamazepine, Phenobarbital, Carbamazepine, Oxcarbamazepine, Temazepam, Flunitrazepam, Clonazepam.
|
| المقدمة Introduction |
الأدوية النفسية هي جميع الأدوية التي تؤثر في الكيان النفسي، والتي تفيد في معالجة الأمراض النفسية بحيث تعيد إلى الدماغ اتزانه وانتظامه، يمكن أن تتمثل التظاهرات النفسية المرافقة باعتلالات بدنية كالصرع.
يمكن أن تصنف الأدوية النفسية إلى:
1- مهدئات نفسية Psychometric تشمل مضادات الاكتئاب Antidepressants، التي يعتمد اختيار العلاج بها على المعطيات السريرية والمخبرية وضبط الجرعة الدوائية (7، 8، 9، 15، 16) وتضم هذه المجموعة:
أ- مضادات الاكتئاب الايميبرامية: وهي عبارة عن أدوية منعشة للنفسية تنبه المزاج وتؤثر عليه بعدة آليات، سواء أدرجينية أو سيروتونية أو تأثير مضاد لقدرة الكولين المركزي أو المحيطي وتشمل المركبات التالية: Trimipramine, Imipramine, Clomipramin... الخ.
ب- مثبطات المونو أمين أوكسيداز MAOI: وهي تستعمل في حالات الاكتئاب الشديد الوصفي وتضم الأدوية التالية:Toloxatone, Moclobemide, Iproniazid.
ج- أدوية متفرقة أخرى: لدوبامينرجيةAmineptine أو رباعية الحلقات كـ Miaserine.
2- مضادات اختلاج Anticonvulsant
يطلق على هذه الأدوية منظمات المزاج وتشمل هذه المجموعة الـPhentoin, Carbamazepine, Valpromid، تتمتع هذه الأدوية بتأثير مضاد للصرع الذي يتمثل بأعراض عصبية (حركية، حسية، نفسية) لا إرادية ناجمة عن نشاط كهربائي كيميائي متواقت وشاذ في الجملة العصبية.
المراحل التي تمر بها نوبات الصرع:
1- اورة أو نسمة aura: وهي أول شعور ذاتي للمريض بقرب بدء النوبة ويدل نوعها على مكان البؤرة الصرعيه وهي مرحلة ظهور الأعراض المعممة بوضوح.
2- النوبة attack وهي مرحلة ظهور الأعراض المعممة بوضوح.
3- الهدأة postictal period وهي المرحلة التالية للهجمة.
أشكال النوب الصرعية:
1- النوب الجزئية partialseizures (1) البسيطة أو المعقدة مثل الصرع النفسي الحركي psychmotore pilepsy.
2- النوب المعممة generalised seizures (2) ولها شكلين: النوب المعممة الاختلاجية المقوية الرمعية tonic–clonic للصرع الكبير grand mal (3)، والنوب المعممة غير الاختلاجية للصرع الصغير petit Mal (4) والرمع العضلي myoclonus والحالة الصرعية المستمرة states epileptic (5).
3- مركنات وحالات القلق Anxiolytics.
وهي أدوية عرضية تستعمل فقط في حالات القلق المرضية المنشـأ وهي فعالــة في
الاضطرابات الحادة والمزمنة.
يجب البدء بمقادير ضعيفة تزداد تدريجياً شريطة ألا تتجاوز فترة الاستعمال الشهر الواحد، ويجب ضبط الجرعة وإجراء معايرة للدواء باستمرار وأهم المركبات مشتقات Benzodiazepine والـ Barbiturate.
يتوجب على المهتمين في معالجة الأمراض النفسية معرفة نوعية للدواء الموصوف والجرعة الفعالة والمناسبة للسيطرة على الأعراض عند حدوثها أو تلافيها. فلهذه المركبات تأثيرات جانبية عديدة عصبيه، كبديه والإدمان. ويتعلق النجاح في السيطرة على الأعراض الجانبية التي تسببها هذه الأدوية في تحدد الجرعة بشكل دقيق لأن الحدود بين الجرعة العلاجية والسمية ضيقة (6-10)، وقد تمكن الكثير من الباحثين في هذا المجال من معايرة هذه المركبات أو مستقلباتها باستخدام تقنيات وطرق استخلاص مختلفة (16-11).
في هذا البحث تم العمل على إيجاد طريقة استخلاص ومعايره مرجعية تكرارية تعطي نتائج تفيد العاملين في مراكز التوافر الحيوي وفي مخابر التحليل الطبية والكيميائية. وذلك باختيار الأدوية الأكثر حداثة والمستخدمة لمعالجة الأمراض النفسية بما فيها الصرع، ومن مجموعات كيميائية متشابهة الخصائص الفيزيائية،
|
| المواد والطرق Materials and Methods |
1) المنتجات المدروسة Studied Products
تمت دراسة بعض الأدوية المؤثرة في الكيان النفسي والمستعملة في المعالجة psychiatric drugs وهي من مجموعات دوائية مختلفة ومن صيغ كيميائية متباينة أو متقاربة. يوضح الجدول 1، البنية الكيميائية والخصائص الفيزوكيميائية لهذه المركبات: |
الجدول1: الصيغ الكيميائية والخصائص الفيزوكيميائية للأدوية المدروسة.
الخصائص الفيزيائية والكيميائية |
الصيغة الكيميائية |
المركب |
|
مسحوق مبلور أبيض ، عمليا ً غير منحل في الماء و لا ينحل في الايثر, منحل في كلور الميثيلين, قليل ا لانحلال في الأسيتون والكحول . نقطة انصهار ه 186 - 1 8 9°م ، وزن ه الجزيئي 250.3 . |
|
أوكسكاربامازيبين
C 15 H 10 N 2 O 2
Oxcarbamazepine
Anticonvulsant) ) |
1 |
مسحوق مبلور أبيض عمليا ً غير منحل في الماء و لا ينحل في الايثر, منحل في كلور الميثيلين, قليل ا لانحلال في الأسيتون والكحول . نقطة انصهار ه 189 - 193°م، وزن ه الجزيئي 236.3 . |
|
كاربامازيبين
C 15 H 12 N 2 O
Carbamazepine (Anticonvulsant) |
2 |
مسحوق مبلور أبيض عمليا ً غير منحل في الماء و لا ينحل في الايثر, منحل في كلور الميثيلين, قليل ا لانحلال في الأسيتون والكحول . نقطة انصهار ه 157 - 160°م، وزن ه الجزيئي 300.7 . |
|
ت ي مازيبام Temazepam C 16 H 13 ClN 2 O 2
(Sedative ) (hypnotic)
|
3 |
مسحوق مبلور أبيض يميل للصفرة ، عمليا ً غير منح ل في الماء, منحل في الأسيتون قليل ا لانحلال في الكحول والايثر . نقطة انصهار ه 168 - 172°م، وزن ه الجزيئي 313.3 . |
|
فلونيترازيبام
Flunitrazepam
C 16 H 12 FN 3 O 3
(Hypnotic) |
4 |
مسحوق مبلور مصفر عمليا ً غير منحل في الماء لا ينحل في الايثر, قليل ا لانحلال في الأسيتون والكحول . نقطة انصهار ه 239°م، وزن ه الجزيئي 315.7 . |
|
كلونازيبام Clonazepam C 15 H 10 ClN 3 O 3 (Anticonvulsant) |
5 |
مسحوق مبلور أبيض قليل الانحلال في الماء, منحل في الاغوال, ينحل في الايثر . نقطة انصهار ه 176°م، وزن ه الجزيئي 232.2 . |
|
الفينوباربيتال
C 12 H 12 N 2 O 3 Phenobarbital (Sedative)
(Anticonvulsant) |
6 |
|
| 2- خطة البحث Plan of Research |
يتركز البحث حول النقاط التالية:
1– اختيار الأدوية الأكثر شيوعاً والمستخدمة لمعالجة الأمراض النفسية ومن مجموعات كيميائية متنوعة.
2- إجراء استخلاص لهذه الأدوية من الأوساط الحيوية باستخدام تقنية استخلاص سائل- صلب SPE و/أو سائل/ سائل SLL.
3- إجراء فصل ومقايسة للأدوية المختارة باستخدام طريقة الـ PLC طور عكوس في سوائل حيوية (مصل)
4- إيجاد طريقة مرجعية وذات تكراريةجيدة في الاستخلاص والمعايرة تعطي نتائج تفيد في مجال مخابر التحاليل الطبية وفي مراكز التوافر الحيوي لضبط جرعة العلاج.
|
| 3- الكيميائيات والكواشف Chemicals and Reagents |
|
تم استخدام المواد الكيميائية التالية:
أ- عياريات هي عبارة عن أملاح نقية لكل من: الفينوباربيتال Phenobarbital؛
أوكسكاربامازيبين Oxcarbamazepine؛
تيمازيبام Temazepam؛ فلونيترازيبام Flunitrazepam؛ كلونازيبام Clonazepam؛ الكاربامازبين Carbamazepine (كشاهد داخلي).
ب- مذيبات مختلفة (اسيتونتريل, حمض فسفور، ميثانول, فسفات أحادية أو ثنائية البوتاسيوم، ماء ثنائي التقطير) جميعها من Prolabo و Merck. |
4- المعدات والأجهزة Equipments |
تم استعمال الأجهزة التالية:
أ- جهاز HPLC من Jassco JCL6000 مزود بمحقنة 20 مكرولتر وجهاز الأمواج فوق الصوتية Ultrason، متحري متغير طول الموجة ويعمل بنظام الـ Gradient ومضخة تعمل بالنمطين Isocratic and Gradient.
ب- عمود: Nucleosil 5mm (x 46 mm 250)، جهز بعمود حماية Guard column.
ج- مراشح 0.45 ملم تستعمل لمرة واحدة (Waters).
د- كارتردج اوكتاديسيل (Sep-pak Plus Cartridge C18) (Waters).
5- الشروط الاستشرابية (الكروماتوغرافية) Chromatographic Condition: تم تحضير طور متحرك مكون من المزيج التالي: دارئة فسفات 15 ميلي مول/ ميثانول/ اسيتونتريل/ تري ايثيل أمين 62.25/ 21.0/ 16.5 / 0.25 حجم/ حجم، 3.5 = pH.
بعد الترشيح بمراشح 0.45 ملم، والتخلص من الغازات بواسطة جهاز الأمواج فوق الصوتية Ultrason، تم حقن العينات بمعدل تدفق 1.0 مل/ دقيقة. وبطول موجة الفصل والتحري 240 نانومتر.
6– العينات المدروســة Studied Samples عبارة عن مواد أولية معيارية تم الحصول عليها من منظمة الصحة العالمية WHO. تم الحصول على المصل من قبل أشخاص يخضعون للعلاج بأدوية نفسية، ولتأمين إدخال الدواء إلى المصل مباشرة تم إتباع الخطة التالية:
1- وزن كمية محددة ونقية من ملح المادة الدوائية.
2- الحصول على مصل أشخاص أصحاء لا يتناولون أي دواء بحيث تجرى لهذه المصول جميع الفحوص الكيميائية والإنزيمية اللازمة لمعرفة النتائج والتعاطي معها.
3- مزج الدواء المرغوب دراسته والمحددة
كميته وتركيزه مع المصل السابق وتركه بدرجة حرارة 37?م وعلى هزازة بطيئة نسبياً، بسرعة 120- 180 هزة بالدقيقة مدة 24 ساعة.
4- إجراء هذه الدراسة في جو عقيم بعيداً
عن أي تلوث لأنه سيغير جميع النتائج.
|
| الطرق، التطبيقات والنتائج
Procedures, applications and results
|
الطرق Procedures
كانت الطرق التي أخذت بعين الاعتبار أثناء الدراسة على النحو التالي:
1- إجراء مقايسة للعياريات النقية المستخدمة كلاً على حده بوجود شاهد داخلي وإيجاد الشروط الاستشرابية (الكروماتوغرافية) المثلى من حيث الفصل والمقايسة والحد الأدنى للكشف واختيار طول الموجة والطور المتحرك والثابت المناسبين وذلك حسب المخطط 1.
2- تحضير مزيج عياري لكل من: الفينـوباربيتال Phenobarbital، أوكسكاربامازيبين Oxcarbamazepine، تيمازيبام Temazepam، فلونيترازيبام Flunitrazepam، كلونازيام Clonazepam، الكاربامازيبين Carbamazepine (كشاهد داخلي).
بعد إذاب،تها بالطور المتحرك وصولا إلـى
تركيز 40 مكغ /مل، وذلك حسب المخطط 2
الذي يمثل عزل الأمزجة المعروفة التركيب والمحضرة بتراكيز محددة، باستخدام الشروط التجريبية التالية:
- المضخة: PU-980 Jassco، والمكشاف: Jassco U.V-970.
- طول الموجة: 240 n.m.
- الحساسية: 0.02 AUFS.
- العمود (250 mm x 46 mm) Nucleosil 5? C18.
- الطورالمتحرك: دارئة فسفات 15 ميلي
مول/ ميثانول/ اسيتونتريل/ تري ايثيل أمين62.25 / 21.0 / 16.5 / 0.25 حجم/ حجم 3.5= pH.
- معدل التدفق: 0.5 مل / دقيقة.
- درجة الحرارة: ambient.
3- إجراء دراسة كيفية Qualitative study بهدف التعرف على تكرارية كل من زمن الاحتباس TR، وعامل الفاعلية `K، وعامل الفصل Rs، وعامل الانتقائية ? والجدول 3 يوضح ذلك. |
الكارباما زيب ين Carbamazepine |
أوكسكاربامازيبين Oxcarbamazepine |
الفينوباربيتال Phenobarbital |
شروط الفصل |
|
|
|
الطور المتحرك: دارئة فسفات 15 ميلي مول/ مي ث انول/ اسيتونتريل/ تري اي ث يل أمين 62.25 / 21.0 / 16.5 / 0.25 حجم/ حجم ، 3.5= pH |
| العمود: (250 mm x 46 mm) Nucleosil 5 m C18 |
| المتحري: Jassco U.V-970 يعمل بنظام الـ Gradient و Isocritic وبطول موجة متغير |
| الكارباما زيب ين Carbamazepine ( كشاهد داخلي) |
كلونازيبام Clonazepam |
فلونيترا ترازيبام Flunitrazepam |
تيمازيبام Temazepam |
شروط الفصل |
|
|
|
الطورالمتحرك: دارئة فسفات 15 ميلي مول/ مي ث انول/ اسيتونتريل/ تري ايثيل أمين 62.25/ 21.0/ 16.5/ 0.25 حجم/ حجم ، 3.5= pH |
| العمود: (250 mm x 46 mm) Nucleosil 5 m C18 |
| المتحري: Jassco U.V-970 يعمل بنظام الـ Gradient و Isocritic وبطول موجة متغير |
الكاربامازيبين Carbamazepine
( كشاهد داخلي) |
المخطط 1: معايرة الأدوية المستعملة لعينات عيارية كلاً على حده.
|
|
4- إجراء دراسة كميةQuantitative Study على مواد عيارية بهدف دراسة معامل الاختلاف %C.Vومعامل التقهقر R ومعادلة التقهقر Regression equation r2 (n=10)والحد الأدنى للكشف Limit of Detection، وتعيين التركيز المعنون والتركيز المحقون وحساب معادلة ومعامل التقهقر للمركبات المدروسة، وتحري ثوابت المركبات ثم حقن مزيج من المركبات السابقة في جهاز الـ HPLC وصولاً لدراسة الشروط المثلى للفصل بعد أن تم حقن كل مركب على حده وصولاً إلى أفضل فصل من أجل الاستفادة منها في جميع المقايسات، ويبين الجدول 4 نتائج هذه الدراسة إستناداً شاهد داخلي وباستخدام الشروط التجريبية السابقة.
|
1- Phenobarbital. 2- Oxcarbamazepine. SI- Carbamazepine.
3- Temazepam. 4- Flunitrazepam. 5- Clonazepam.
المخطط 2: فصل الأدوية المضادة للاختلاج لعينات عيارية ضمن مزيج وحيد. |
الجدول 3: الدراسة الكمية للأدوية النفسية المدروسة.
عامل الانتقائية
a |
عامل الفصل
Rs |
عامل الفاعلية
K' |
زمن الاحتباس
TR |
المركب |
|
- |
- |
- |
2.20 |
المذيب |
0 |
- |
- |
3.6 |
4.60 |
الفينوباربيتال Phenobarbital |
1 |
2.63 |
1.44 |
4.65 |
5.65 |
أوكسكاربامازيبين Oxcarbamazepine |
2 |
3.18 |
1.39 |
6.0 |
7.00 |
الكاربامازيبين Carbamazepine (شاهد داخلي) |
3 |
2.82 |
1.25 |
7.2 |
8.20 |
تيمازيبام Temazepam |
4 |
4.11 |
1.33 |
9.15 |
10.15 |
فلـونيترازيبام Flunitrazepam |
5 |
5.14 |
1.45 |
12.75 |
13.75 |
كلونازيبـــام Clonazepam |
6 |
|
الجدول 4: الدراسة الكمية للأدوية النفسية باستخدام شاهد داخلي.
معامل التقهقر Regression coefficient |
الحد الأدنى
للكشف
نغ / مل
LOQ |
معادلة التقهقر
Regression equation
r2(n=10) |
معامل الاختلاف
C.V |
التركيز المحقون في HPLC
mg/l |
تركيز محلول أ م
mg/l |
المركب |
|
0.9999 |
0.12 |
Y= - 1.8+1520 X |
1.15% |
40 |
100 |
الفينــوباربيتال Phenobarbital |
1 |
0.9998 |
0.22 |
Y= + 1 9.3+1410 X |
0. 8 % |
40 |
100 |
أوكسكاربامازيبين Oxcarbamaze-pine |
2 |
0.9989 |
0.24 |
Y= - 7.8 +170 X |
0.98% |
80 |
200 |
الكاربامازيبين Carbamazepine (شاهد داخلي) |
3 |
0.9992 |
0.22 |
Y=-160.2 + 740.9 X |
0.4 0 % |
20 |
50 |
تيمازيبام Temazepam |
4 |
0.9989 |
0. 45 |
Y= -5.4 + 79 X |
0.52% |
10 |
10 |
فلـونيترازيبام Flunitrazepam |
5 |
0.9998 |
0.54 |
Y= -10.4 + 143 X |
0.44% |
20 |
20 |
كلونازيبـــام Clonazepam |
6 |
|
5- تعيين نسبة الاسترداد بعد الاستخلاص باستخدام تقنية استخلاص سائل / سائل (SLL) اعتماداً على إجراء دراسة كمية وكيفية Quantitative and qualitative Study حيث تمت دراسة معامل الاختلاف %C.V ومعامل التقهقر Rومعادلة التقهقر Regression equation r2 (n=10) وعيار المادة الفعالة قبل وبعد الاستخلاص، ويوضح المخطط 3 خطة الاستخلاص، والجدول 5 يوضح النتائج الكمية.
6- تعيين نسبة الاسترداد بعد الاستخلاص باستخدام تقنية استخلاص سائل/ صلب (SEP) اعتماداً على إجراء دراسة كمية وكيفيةQuantitative and qualitative Study حيث تمت دراسة معامل الاختلاف %C.V ومعامل التقهقر R ومعادلة التقهقر Regression equation r2 (n=10) وعيار المادة الفعالة قبل وبعد الاستخلاص والمخطط 4 يوضح خطة الاستخلاص، والجدول 6 يوضح النتائج الكمية.
|
2 مل دم + 7 مل تولوين + 0.1 ماءات ال أ مونيوم المركزة
 يمزج جيد اً مدة 15 دقيقة
ينبذ ويرمى الدم
تمزج طبقة التولوين مع 2 مل من حمض الكبريت 0.2 ن
 
يضاف للطبقة الحمضية نقطة من مشعر وتقلون ب ال صود 2.5 ن
|
تُمزج طبقة التولوين مع 2 مل من حمض كلور الماء 6 ن
|
تُمزج مع 3 مل تولوين |
تُنبذ وترمى الطبقة المائية |
تنبذ وترمى الطبقة المائية و يغسل التولوين مع 0.5 مل ماء مقطر |
تبرد الطبقة الحمضية وتجمد |
تنبذ وترمى الطبقة المائية و ي بخر التولوين |
يضاف للطبقة الحمضية نقطة من مشعر وتقلون ب ال صود 5 ن |
تحل الرسابة بـ 300 مكل من الطور المتحرك وي ُ حقن 25 مكل بـ HPLC |
يُمزج مع 3 مل تولوين |
A الجزء |
تنبذ وترمى الطبقة المائية و ي غسل التولوين مع 0.5 مل ماء مقطر |
|
تُنبذ وترمي الطبقة المائية و ي بخر التولوين |
تحل الرسابة بـ 300 مكل من الطور المتحركويحقن ن 25 مكل بـ HPLC |
B الجزء |
المخطط 3: استخلاص الأدوية النفسية بطريقة سائل - سائل من الأوساط الحيوية. |
الجدول 5: تعيين نسبة الاسترداد بعد الاستخلاص سائل/ سائل (SLL).
معامل التقهقر Coefficient regression |
معادلة التقهقر
Regression equation
r 2 (n=10) |
معامل الاختلاف
C.V. |
عينة بعد الاستخلاص
mg/l |
عينة قبل الاستخل ا ص
mg/l |
المركب |
|
0.9988 |
Y= - 1.5+1414 X |
7% |
93 |
100 mg |
الفينوباربيتال Phenobarbital |
1 |
0.9998 |
Y= +29.0+148.70 X |
7.5% |
92.5 |
100 mg |
أوكسكاربامازيبين Oxcarbamazepine |
2 |
0.9989 |
Y= - 15.0 +190.6 X |
5.0% |
190 |
200 mg |
الكارباما زيب ين Carbamazepine (شاهد داخلي) |
3 |
0.9892 |
Y= -160.2 + 350.1 X |
10% |
45 |
50 mg |
تيمازيبام Temazepam |
4 |
0.9788 |
Y= -9.8 + 67. 8 X |
15% |
8.5 |
10 mg |
فلـونيترازيبام Flunitrazepam |
5 |
0.9888 |
Y= -6.8 + 107 X |
10% |
18 |
20 mg |
كلونازيبـــام Clonazepam |
6 |
|
6- إيجاد طريقة مقايسة لهذه الأدوية في المصل سواء كانت لوحدها أو مع بعضـها
البعض والنتائج موضحة في الجدول 7.
|
| التطبيقات Applications |
تم اعتماد الدراسات الكمية والكيفية السابقة لتطبيقها على المركبات التالية:
1- مصل أضيف إليه تركيز معين من الدواء واتبعت الخطة المشروحة سابقاً وأجري له استخلاص باعتماد تقنية استخلاص سائل/ صلب (SEP) وتقنية استخلاص سائل/ سائل SLL)) وتم الحصول على النتائج الموضحة في الجدولين 5 و 6.
2- نتائج مصل مرضى يخضعون للمعالجة بأدوية نفسية، وخاصة لمن يتناولون معالجة وحيده أو ثنائية أو أكثر كما واعتماد طريقة SEP للاستخلاص الموضحة في المخطط 4 واستخدام المخطط العياري الموضح في المخططين 1 و 2 والجدولين 3 و 4.
|
| الاستنتاج Conclusion |
| |
| |
من خلال ما تقدم نستطيع تدوين ما يلي:
1- تم إيجاد طريقة استخلاص مناسبة على الرغم من أن هذه المشتقات تملك بنى كيميائية وخصائص فيزوكيميائية بعضها متشابه وبعضها مختلف وهذا ما توضحه الجداول
والمخططات السابقة الذكر.
2- تم وضع دراسة إحصائية كميه Quantitative وكيفيه Qualitative، تعتمد على تحديد العديد من المعالم Parameters حيث كان معامل التقهقر Regression coefficient 0.9889 ومعامل الاختلاف يقع بين 0.44 - 1.15% ، والحد الأدنى للكشف يقع بين 0.12 – 0.54 نغ/ مل كما هو موضح في الجدول 4.
3- تم إيجاد طريقة مقايسة الأدوية النفسية في المصل من خلال استخدام طريقة فصل صلب/ سائل (SEP) وسائل/ سائل (SLL) وتقنية HPLC الطور العكوس كما هو موضح في المخططات 1، 2، 3، 4 والجدولين 6 و 7.
4- يمكن تطبيق النتائج في مجال مخابر التحاليل الطبية والتوافر الحيوي ومراكز مكافحة التسمم.
|
| 200 مكرولتر من عينة المصل الحاوية على الدواء النفسي |
| ميثانول/ ماء (50 / 50) |
| تُنبذ مدة 5 دقائق بسرعة 500 دورة بالدقيقة |
| رشاحة راسب |
| مل 1% ميثانول في ماء |
| 2 مل أسيتونتريل + 4 مل ميثانول |
| تُمرر الخلاصة بالكارترج Sep-Pak plus C18 |
| يُرشح الناتج على فلتر 0.45 ملم |
| يُحقن بـ HPLC |
مخطط 2: استخلاص الأدوية النفسية بطريقة سائل- صلب من الأوساط الحيوية. |
الجدول 6: تعيين نسبة الاسترداد بعد الاستخلاص سائل/ صلب (SEP).
معامل التقهقر Coefficient regression |
معادلة التقهقر
Regression equation
r 2 (n=10) |
معامل الاختلاف
C.V |
عينة بعد الاستخلاص Mg/l |
عينة قبل الاستخلاص
Mg/l |
المركب |
|
0.9998 |
Y= - 2.5+165.4 X |
2.0% |
98 |
100 mg |
الفينوباربيتال Phenobarbital |
1 |
0.9999 |
Y= +34+166.70 X |
2.5% |
97.5 |
100 mg |
أوكسكاربامازيبين Oxcarbamazepine |
2 |
0.9999 |
Y= - 10.0 +170.9 X |
1.0% |
99 |
200 mg |
الكاربامازيبين Carbamazepine (شاهد داخلي) |
3 |
0.9998 |
Y= -16.2 + 150.0 X |
2.0% |
51 |
50 mg |
تيمازيبام Temazepam |
4 |
0.9988 |
Y= -2.8 + 60. 8 X |
5.0% |
9.5 |
10 mg |
فلـونيترازيبام Flunitrazepam |
5 |
0.9999 |
Y= -5.7 + 187 X |
2.5% |
19.5 |
20 mg |
كلونازيبـــام Clonazepam |
6 |
|
الجدول 7: تعيين نسبة الاسترداد بعد الاستخلاص SEP لمصل مرضى يخضعون للمعالجة النفسية.
معامل التقهقر Coefficient regression |
معادلة التقهقر
Regression equation
r2 (n=10) |
معامل الاختلاف
C.V |
التركيز بعد الاستخلاص mg / ml |
الجرعة المتناولة
mg |
المركب |
|
0.9988 |
Y= - 3.5+155.7 X |
3.2 % |
20.9 |
45 |
الفينــوباربيتال Phenobarbital |
1 |
0.9899 |
Y= +30+160.40 X |
6.0 % |
5.7 |
100 |
أوكسكاربامازيبين Oxcarbamazepine |
2 |
0.9998 |
Y= - 8.5 +176.6 X |
3.8 % |
6.5 |
200 |
الكاربامازيبين Carbamazepine (شاهد داخلي) |
3 |
0.9988 |
Y=-11.2 + 157.0 X |
6. 3 % |
5.6 |
100 |
تيمازيبام Temazepam |
4 |
0.9889 |
Y= -4.8 + 66. 5 X |
4.0 % |
7. 5 |
30 |
فلـونيترازيبام Flunitrazepam |
5 |
0.9987 |
Y= -5.1 + 198 X |
6.5 % |
9. 5 |
40 |
كلونازيبـــام Clonazepam |
6 |
|
| المراجع References |
1-Bowery N.G.
The Kinding modle of epilepsy.
Trends pharmacol Sci, 3: 400-
403, 1982.
2-Roth D.L. and Bachtler S.D.
Perception of emotional expression in patients with complex partial seizures.
Presented at the annual meeting of the International Neuropsycho-logical Society, Orlando, 1990.
3-Fischer-Williams M. and Clifford B. C.
A study with 10 subjects with complex partial seizures or major seizures of 11-19 years. All subjects were able to obtain greater seizure control.
Annals of Behavioral Medicine, 8(1): 21-25, 1986.
4-Sterman M. B.
Biofeedback. different types of epilepsy and stress that causes problems with diagnosis polypharmacy recidivism and treatment.
Epilepsia, 15: 395-416, 1974.
5-Sokic D.
Status epilepticus: retrospective analysis of clinical characteristics over a 5-year period.
Srp. Arh. Celok. Lek. 118(9-10): 367-373, 1990.
6-Bertilsson L. and Tomson T.
Clin. Pharmacokinetics, 11: 177-198, 1986.
7-Bauer L.A. and Harris C.
Clin. Pharmacol. Ther., 31: 741-745, 1982.
8-Browne T. R., Evans J.E. and Szabo G.K.
J. Clin. Pharmacol., 25: 51-58, 1985.
9-Levine M. et al.
Clin.Pharmacokinet., 19: 341-358, 1990.
10-Martines C. and Gatti G.
J. Clin. Pharmacol., 30: 607-611, 1990.
11-Mandriolia R. and Albanib F.
J. of Chromatography, 762(2): 109-116, 2001.
12-Guan F., Ubohb C.E. and Lawrence R.
J. of Chromatography, 746(2): 209-218, 2000.
13-Bardin S., Ottinger J.C., Breau A.P. and O'Shea T.J.
J. of Chromatography, 23(2-3): 573-579, 2000.
14-Alolabi D., Akhras G. and Hassan A.
thesis of Master in clinical chemistry, Faculty of pharmacy, Damascus University, 2001
15- Hassan A.
Simultaneous Determination of Some Anticonvulsants in Some Pharmaceutical Preparations and in Serum by HPLC.
Arab J. of pharm. Sci., 2(4): 83-93, 2003.
16-Alolabi D., Akhras G. and Hassan A.
Study of Assay Methods of phenytoin.
J. for health Sci., 19(1): 201-213, 2003. |
| |
