| الملخص Abstract |
| تم الكشف عن الأضداد المضادة للغليادين والأضداد المضادة للإندوميزيوم في مصل مجموعة مؤلفة من 32 مريضاً مصاباً بالجيارديا، وذلك بطريقتي الامتزاز المناعي المرتبط بالإنزيم ELISA والفلورة المناعية غير المباشرة Indirect Immunofluorssence، وأيضاً دراسة معامل الاقتران Association coefficient بين نتائج كلا الطريقتين لكل من الواصمين على حده. لقد أظهرت النتائج ارتباطاً قوياً جداً بين كلا الطريقتين لكل واصم على حده. |
| The levels of Antigliadin antibodies and Anti Endomysiom antibodies were detected in the serum of a group of 32 patients with Giardiasis, and this was by two methods ELISA and Indirect Immunofluorssence, then we defined the Association Coefficient between the results of the two methods for each marker, and the results showed a very strong correlation between the tow methods for each marker. |
| المقدمة Introduction |
يُعد اختباري الأضداد المضادة للغليادينAnti Gliadin Antibodies والأضداد المضادة للاندوميزيومAnti Endomysiom Antibodies من الاختبارات الهامة في تشخيص الإصابة بالداء الزلاقي بشكل خاص، والإصابة بالاعتلالات المعوية المضيعة للبروتين المؤدية إلى سوء الامتصاص بشكل عام (2).
ونظراً لاستخدم طريقتي التألق المناعي غير المباشر Indirect Immunofluoresence Assay والمقايسة المناعية الإنزيمية Enzyme Linked ImmunoSorbant Assay لمعايرة الـ AGA والـ AEA، فقد تمت مقارنة هاتين الطريقتين وذلك من خلال مقايسة عدد محدد من العينات لأطفال يعانون من الإصابة بداء الجيارديا المعوية، الذي يعتبر أحد أدواء الاعتلال المعوي المسبب لسوء الامتصاص بحالته المزمنة بكلا الطريقتين (4).
|
| المواد والطرق Materials and Methods
|
الاعتيان Sampling
تم أخذ عينات الدم على أنابيب زجاجية جافة لا تحوي مضاد تخثر.
مجموعة الدراسة Study subject
شملت الدراسة مجموعة الأطفال المصابين بداء الجيارديا المعوية المزمن وعددهم 32 طفلاً.
الطرق المستخدمة في الدراسة
استخدم في هذه الدراسة أربعة أنواع من العتائد المختلفة:
1- عتيدة لمعايرة الأضداد المضادة للغليادين (نمط IgA) بطريقة الامتزاز المناعي المرتبط بالإنزيم (ELISA)، لشركة RADIM الإيطالية. تعتمد هذه الطريقة على ارتباط أضداد الغليادين في حال وجودها في المصل مع الغليادين (Ag) المغلف للحجرات، ويتم التحري عن الأضداد المرتبطة بإضافة أضداد مضادة للـ IgA البشري موسومة إنزيمياً مما يحرض حدوث تفاعل لوني وتعود شدة اللون إلى تركيز الأضداد الموجودة.
يُعد الحد الأعلى للقيم المنصوح بها من قبل شركة الـ Euroimmun حوالي relative unit/ml20 و تُعد القيمة الأعلى إيجابية والقيم الأقل سلبية (3، 5).
2- عتيدة لمعايرة الأضداد المضادة للغليادين (نمط IgA) بطريقة التألق المناعي غير المباشر لشركة Biosystems.
تعتمد هذه الطريقة على ارتباط الأضداد المضادة للغليادين (AGA) الموجودة في مصل المريض مع المستضدات الموافقة الموجودة على شريحة كلية الجرذ المعاملة مسبقاً بالغليادين، حيث يرتبط الغليادين بشكل نوعي مع بروتين الألياف الشبكية (الشبكين)، يتم التحري عن معقد الضد- المستضد بواسطة مجهر الفلورةFluorescence Microscope بعد إضافة ضد- الضد البشري Anti-Human Immunoglobulin الموسوم بالفلورويسئين.
تم تمديد المصل بنسبة 1/40 بواسطة دارئة الفسفات، وفي حالة العينات الإيجابية تم عمل سلسلة تمديدات بواسطة دارئة الفسفات مبتدئين بالتمديد1/40 وذلك من أجل التحديد الدقيق لعيار العينة.
3- عتيدة لمعايرة الأضداد المضادة للإندوميزيوم (نمط IgA) بطريقة الامتزاز المناعي المرتبط بالإنزيم (ELISA)، لشركة Euroimmun.
تعتمد هذه الطريقة على حضن عينات المرضى في الحفر الحاوية على مستضدات الأندوميزيوم، ففي حال إيجابية العينات يحصل ارتباط لأضداد الـ IgA النوعية مع المستضدات. ثم يتم التحري عن الأضداد المرتبطة بإضافة أضداد مضادة للـIgA البشري موسومة إنزيمياً مما يحرض حدوث تفاعل لوني وتعود شدة اللون إلى تركيز الأضداد الموجودة. يُعد الحد الأعلى للقيم المنصوح بها من قبل شركة الـ Euroimmun حوالي 20 relative unit/ml و تُعد القيمة الأعلى من هذه القيمة إيجابية والقيم الأقل منه سلبية (1، 6).
4- طاقم لمعايرة الأضداد المضادة للإندوميزيوم (نمط IgA) بطريقة التألق المناعي غير المباشر، لشركتي Biosystems و IMMCO.
حيث ترتبط الأضداد المضادة للإندوميزيوم المصلية مع المستضدات الموافقة الموجودة في شريحة من خلايا الثلث السفلي من المري، ثم يرتبط الضد البشري A الموسوم بالفلوريسئين مع معقد ضد- مستضد، مما يسهل مشاهدته بواسطة مجهر الفلورة بوجود مراشح مناسبة.
يمدد المصل بنسبة 1/5 بواسطة دارئة فسفاتية، ولمعايرة العينات الإيجابية تُجهز سلسلة تمديدات ابتداءً من تمديد 1/5.
|
| النتائج Results |
أظهرت الدراسة النتائج التالية:
I اختبار الأضداد المضادة للغليادين Atni Gliadin Antibodies
1- وجود 9 حالات كان فيها اختبار AGA في الطريقتين ايجابياً.
2- أربع حالات أظهرت إيجابية بطريقة الإليزا وسلبية بطريقة التألق المناعي.
3- حالتين سلبيتين بطريقة الإليزا وإيجابيتين بطريقة التألق المناعي.
4- 17 حالة سلبية بالطريقتين.
ويمكن تمثيل النتائج السابقة بشكل آخر، في الجدول 1.
II اختبار الأضداد المضادة للأندوميزيوم Anti Endomesion Antibodies
أظهرت الدراسة وجود:
1- ثمانية حالات ايجابية بالطريقتين.
2- 20 حالة سلبية بالطريقتين.
3- حالتين ايجابيتين بطريقة التألق المناعي وسلبيتين بطريقة الإليزا.
4- حالتين ايجابيتين بطريقة الإليزا وسلبيتين بطريقة التألق المناعي.
يمكن تمثيل النتائج أيضاً بشكل آخر من خلال الجدول 2
|
| المناقشة Discussion |
- الـ AGA
تمت مقارنة نتائج الطريقتين بتحديد معامل الارتباطAssociation coefficient في مجموعة الدراسة، حيث كانت تعد النتائج في الطريقتين إما سلبية أو إيجابية، فبلغت قيمة معامل الارتباط 0.91 مما يشير إلى أن الارتباط بين الطريقتين قوي جداً.
- الـ AEA
تمت مقارنة نتائج الطريقتين بتحديد معامل الارتباط في مجموعة الدراسة، حيث كانت تعد النتائج في الطريقتين إما سلبية أو إيجابية، فبلغت قيمة معامل الارتباط 0.95 مما يشير إلى أن الارتباط بين الطريقتين قوي جداً.
|
الجدول 1: نتائج طريقة الإليزا وطريقة التألق المناعي.
ELISA
IIF |
+ |
- |
+ |
9 |
2 |
- |
4 |
17 |
|
الجدول 2: نتائج طريقة الإليزا وطريقة التألق المناعي.
ELISA
IIF |
+ |
- |
+ |
8 |
2 |
- |
2 |
20 |
|
| الاستنتاج Conclusion |
| كانت نتائج طريقة الامتزاز المناعي المرتبط بالإنزيم وطريقة التألق المناعي لكل من المتثابتين AGA و AEA مرتبطة بشكل قوي جدا،ً وبالتالي يمكن استخدام كلاً من الطريقتين في تحري الأضداد المضادة للغليادين والأضداد المضادة للإندوميزيوم وبالتالي يمكن اعتماد أياً من الطريقتين في المخابر |
| المراجع References |
1-Carroccio A; Lacono G; Montalto et al.
Immunological and absorptive tests in celiac disease can they replace intestinal biopsies?
J. Gastroenterol; 28: 673-676, 1993.
2-Dias J; Unsworth D.J. and Wallker-smith J.A.
Lancet; 2: 157-158., 1987.
3-Hill P.G; Thombson S.P. and Holmes G.K.T.
IgA antigliadin antibodies in adult with celiac disease.
Clin.Chem; 37: 647-650, 1991.
4-Juto P; Almlof U; Hernell O. andAhlstedt S.
Evaluation of anti gliadin IgA as a screening method for celiac disease of children.
Pediatric Res; 22: 234, 1987.
5-Grodzinsky E; Hed J; Lieden G; Sjogren G. and Strom M.
Presence of IgA and IgG antigliadin antibodies in healthy adult as measured by micro Elisa.
Int. Arch. Allergy Appl. Immunol; 92: 119-123, 1990.
6-Mc Millan S.A; Hanghton D.J; Biggart J.D. et al.
Predictive value for celiac disease of antibodies to gliadin, endomysium in patient attending for jejunal biopsy.
Br. Med. J; 303: 1163-1165, 1991.
7-Trocone R. and Ferguson A.
Anti gliadin antibodies.
J. Ped. Gastroenterol. Nutr; 12: 150, 1991.
|
| |
