| ÇáãÌáÏ 3 , ÇáÚÏÏ 9 , ÑãÖÇä 1426 - ÊÔÑíä ÇáÃæá (ÃßÊæÈÑ) 2005 |
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| Les effets hépatotoxiques du Paracétamol chez le rat |
| ÇáÊÃËíÑÇÊ ÇáÓãíÉ ÇáßÈÏíÉ ááÈÇÑÇÓíÊÇãæá ÚäÏ ÇáÝÃÑ |
| Ï. æÓíáÉ ÚæÇÔÑí, Ï. ÓÚÏ ÓÇÞÚ æ Ï. ÑÔíÏ ÌÚÝÑ* |
| Aouacheri Wassila, Saka Saad et Djafer Rachid* |
Département de Biochimie, Faculté des Sciences, *Département de Pharmacie, Faculté de Médicine, Université Badji Mokhtar, Annaba, ALGERIE
ÞÓã ÇáßíãíÇÁ ÇáÍíæíÉ, ßáíÉ ÇáÚáæã, * ÞÓã ÇáÕíÏáÉ, ßáíÉ ÇáØÈ, ÌÇãÚÉ ÈÇÌí ãÎÊÇÑ, ÚäÇÈÉ¡ ÇáÌÒÇÆÑ
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| ÇáãáÎÕ Abstract |
ÇÔÊãáÊ ÇáÏÑÇÓÉ ÇáãÎÈÑíÉ Úáì ãÚÇãáÉ ÇáÌÑÐÇä ãä äæÚ Albino wistar ÈËáÇË ÌÑÚÇÊ ãÊÒÇíÏÉ ãä ÇáÈÇÑÇÓíÊÇãæá 100¡200 ¡300 ãáÛ/ßÛ ãÚ æÌæÏ ãÌãæÚÉ ÔÇåÏÉ. ÈÚÏ 72 ÓÇÚÉ ãä ÇáãÚÇãáÉ áæÍÙ Îáá ßÈÏí ãä ÎáÇá ÇáÇÑÊÝÇÚ ÇáãõÚÊÏ Èå ÅÍÕÇÆíÇð Ýí äÔÇØ ÇáÅäÒíãÇÊ äÇÞáÇÊ ÇáÃãíä Ýí ÇáÏã æÇáÇäÎÝÇÖ ÇáãáÍæÙ Ýí ãÍÊæì ÇáÛáæÊÇËíæä ÇáßÈÏí äÙÑÇð áÇÔÊÑÇßå Ýí ÊÝÇÚáÇÊ ÇáÇäÏãÇÌ ãÚ ÇáãÓÊÞáÈ ÇáÓÇã ááÈÇÑÇÓíÊÇãæá (N-acétyl para-benzo quinone imine).
ÊæÖÍ ÇáäÊÇÆÌ ÇáãÎÈÑíÉ ÇáãÓÊÍÕá ÚáíåÇ ÇäÎÝÇÖ Ýí ãÓÊæì ÇáÛáæÊÇËíæä ÇáßÈÏí ÈäÓÈÉ 14% æ25% ÈÚÏ ÇáãÚÇãáÉ ÈÇáÌÑÚÊíä ÇáãÊæÓØÉ æÇáÞÕæì ãä ÇáÈÇÑÇÓíÊÇãæá Úáì ÇáÊÑÊíÈ. ÈÇáäÓÈÉ áÅäÒíãÇÊ äÇÞáÇÊ ÇáÃãíä, Êã ÊÓÌíá ÇÑÊÝÇÚ ãõÚÊÏ Èå ÅÍÕÇÆíÇð Ýí äÔÇØ åÐå ÇáÅäÒíãÇÊ. ÍíË ÒÇÏ äÔÇØ TGP ÈäÓÈÉ 21% æ 33% ÈÚÏ ÇáãÚÇãáÉ ÈÇáÌÑÚÊíä ÇáãÊæÓØÉ æÇáÚÙãì ãä ÇáÈÇÑÇÓíÊÇãæá Úáì ÇáÊÑÊíÈ, Ýí Ííä ÒÇÏ äÔÇØ TGO ÈäÓÈÉ 25% ÈÚÏ ÇáãÚÇãáÉ ÈÇáÌÑÚÉ ÇáÚÙãì ãä ÇáÈÇÑÇÓíÊÇãæá.
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L’étude expérimentale a porté sur le traitement des rats (Albinos wistar) par trois doses croissantes de paracétamol (100, 200, 300 mg/kg), avec la présence d’un lot témoin. Après 72 heures, nous avons constaté une atteinte hépatique qui est démontrée par une augmentation significative de l’activité des transaminases dans le sang et par une diminution significative du taux de glutathion hépatique, car il intervient dans la réaction de conjugaison avec le métabolite toxique du paracétamol (N-acétyl para benzo quinone imine).
Les résultats expérimentaux obtenus ont montré une diminution de la concentration du glutathion de 14 % et de 25 % après leurs traitements respectifs par la dose moyenne (200 mg/kg) et maximaux (300 mg/kg) du paracétamol. En ce qui concerne l’activité enzymatique des transaminases ; une augmentation a été signalée. L’activité TGP a augmentée de 21 % et de 33 % après traitement respectif par les doses moyenne et maximale du paracétamol. Cependant, l’activité TGO a augmentée de 25 % après traitement par la dose maximale du paracétamol.
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| Introduction |
Le paracétamol fait partie de notre quotidien, plus de cinquante spécialités en contiennent. Le prix de revient bas, il constitue l’un des produits les plus vendus au monde. Il demeure une excellente alternative particulièrement chez l’enfant. Il constitue l’un des meilleurs antalgiques (soulage la douleur) et antipyrétiques (diminue la température), par ses effets secondaires réduits engendrés comparativement à l’acide acétyl salicylique. C’est un métabolite actif de l’acétanilide et de la phénacétine, les plus importants dérivés de l’aniline doué des mêmes propriétés que les salicylates, puisqu’elle inhibe la synthèse des prostaglandines (1).
En revanche l’intoxication au paracétamol est devenue la plus fréquente des intoxications accidentelles. Elle reste hantée par le risque de nécrose hépatique (2). La cellule vivante se défend contre les intoxications par plusieurs systèmes enzymatiques localisés surtout au niveau du foie. Parmi ces systèmes, nous citons le système enzymatique du glutathion qui joue un rôle majeur de défense, par les réactions de conjugaison avec les métabolites toxiques résultant du métabolisme des médicaments tel le paracétamol (3).
L’absorption digestive du paracétamol est rapide et totale, s’effectue par diffusion passive dans l’intestin grêle. La forme pharmaceutique influence la vitesse de résorption ; avec une biodisponibilité de 80% pour la forme systémique et 90% pour la forme effervescente. La résorption par voie rectale est légèrement plus lente (4). Le paracétamol a une bonne diffusion tissulaire, le volume de distribution est d’environ 0,8 l/kg (5). Il se distribue dans tous les tissus exceptés dans les graisses. Sa concentration est plus élevée au niveau hépatique dans sa partie médullaire (4). Aux concentrations thérapeutiques, le paracétamol a une faible affinité pour les protéines plasmatiques, la fixation est de l’ordre de 10%. Aux concentrations toxiques, sa fixation augmente de 10 à 20%. Lors d’intoxications aiguës, la liaison aux protéines plasmatiques est de l’ordre de 20 à 50% (5). La demi-vie plasmatique est de 1 à 3 heures chez l’enfant et de 2 à 3 heures chez l’adulte (6).
Le paracétamol est métabolisé, essentiellement au niveau du foie selon deux voies: l’une est principale dont 90% du paracétamol administré sera dégradé en divers métabolites inactifs par:
a/ Sulfo-conjugaison : c’est le principal métabolisme chez l’enfant, et représente 30% chez l’adulte. Elle est dose-dépendante et rapidement saturable pour les doses dépassant 2 g.
b/ Glucuro-conjugaison : c’est la voie métabolique la plus importante chez l’adulte, car elle intervient pour 60%. Elle est aussi dose dépendante (5).
L’autre voie est un accessoire d’importance secondaire, qui intéresse une faible fraction de la dose ingérée (4%), métabolisée par des acétylations et des N-hydroxylations, sous l’influence d’une mono-oxygénase à cytochrome P-450 aboutissant à un dérivé N-hydroxylé instable à température à pH physiologiques. Ce dernier à son tour subit par déshydratation, une transformation en un métabolite potentiellement toxique : le N-acétyl para-benzo quinone imine, qui est électrophile, très réactif, ayant donc des propriétés de radical libre. Ce métabolite est détoxifié par conjugaison au glutathion réduit hépatique, et il est éliminé dans les urines sous forme d’acide mercapturique non toxique (5, 7).
En fin le paracétamol est éliminé sous un aspect presque entièrement métabolisé inactif. Une faible fraction inférieure à 5% de la dose administrée est excrétée sous forme inchangée dans les urines. La demi-vie d’élimination du paracétamol est de 2 heures (8). Habituellement, l’ingestion de 5 à 10 g du paracétamol chez l’adulte est considérée comme une dose toxique, alors que chez l’enfant, elle est de 100 à 150 mg/kg (5).
Le glutathion est largement distribué dans le milieu intracellulaire des animaux, des plantes et des micro-organismes. C’est un tripeptide formé de la succession de trois acides aminés : ?-glutamyl, L-cystéinyl, glycine (9, 10). Grâce au groupement thiol (-SH) de la cystéine, le glutathion joue un rôle important dans la détoxication. Au niveau des échantillons biologiques, le glutathion existe sous différentes formes, il peut être réduit (GSH), oxydé (GSSG), lié aux protéines (GSS-protéine) ou lié à un résidus approprié comme le coenzyme A (11). Dans les conditions normales, la grande partie du glutathion se trouve sous la forme réduite et libre (GSH), cependant la forme oxydée (GSSG) se trouve à des concentrations plus petites que celles du GSH, d’où le rapport GSH/GSSG est toujours d’environ 10/1 (9, 12). La diminution de la concentration du GSH de 30 % par rapport au taux normal, au niveau du foie, peut causer des perturbations qui augmentent la toxicité des métabolites toxiques résultant du métabolisme
des composés étrangers tels les médicaments (12, 13). Le glutathion assure son fonctionnement grâce à tous les éléments du système qui sont des enzymes très importantes: glutathion péroxydase (EC: 1.11.1.9), glutathion réductase (EC: 1.6.4.2) et glutathion S-transferase (EC: 2.5.1.18).
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| Protocole expérimental |
32 rats sont accoutumés pendant six semaines aux conditions de l’animalerie dont la température ambiante est de 25 ± 2 C°. Ils ont été nourris par un régime alimentaire complet incorporé avec un mélange vitaminique et minéral. Après la période d’accoutumance, les rats ont été répartis en quatre lots de 8 rats chacun ; un lot témoin traité par l’eau minérale et les trois autres lots sont traités respectivement par le paracétamol selon les doses suivantes : une dose minimale de 100 mg/kg, une dose moyenne de 200 mg/kg et une dose maximale de 300 mg/kg. Après 72 heures après le traitement, nous avons d’une part recueilli le sang pour servir au dosage des transaminases sériques. D’autre part nous avons décapité les rats afin de prélever le foie qui va servir au dosage du glutathion.
Le glutathion hépatique est dosé selon la méthode de Weckbercker & Cory (14). Le principe repose sur la mesure de l’absorbance optique de l’acide 2-nitro-5-mercapturique résultant de la réduction de la dithiobis nitro acide benzoique (DTNB) par le groupement thiol du GSH. La concentration des protéines est effectuée par la méthode de Bradford (15). Le dosage des transaminases sériques a été effectué selon une technique cinétique enzymatique (16). Les résultats obtenus sont traités statistiquement par le test t de Student.
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| Résultats |
Les résultats du tableau 1 montrent que la concentration du glutathion est inversement proportionnelle aux doses utilisées du paracétamol. En comparant avec le lot témoin, nous avons trouvé une diminution très significative (P<0,01) de la concentration du GSH évaluée de 14% chez le lot des rats traités par la dose moyenne (200 mg/kg) du paracétamol. Au niveau de la dose maximale (300 mg/kg), le taux du GSH a baissé d’une valeur très hautement significative de 25% (P< 0,001).
L’activité enzymatique des transaminases (TGO et TGP) a connu une augmentation significative. Pour la TGP, l’activité a augmenté au niveau de la dose moyenne (200 mg/kg) et maximale (300 mg/kg) respectivement de 21% (P< 0,05) et 33% (P< 0,001) (Tableau 2).
Cependant l’activité TGO a augmenté significativement (P< 0,05) au niveau de la dose maximale de 25% (Tableau 3).
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| Discussion |
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Ces résultats confirment que le paracétamol est hépatotoxique. Le glutathion reste un élément essentiel dans la détoxication des substances toxiques. Lors d’une intoxication aiguë, la diminution du taux de glutathion hépatique est expliquée par l’afflux massif de paracétamol qui sature la sulfo-conjugaison. Par augmentation de son substrat, la voie de détoxication par conjugaison au glutathion prend de l’importance et va conduire à une formation accrue du N-acétyl para-benzo quinone imine toxique (17, 18). La conjugaison au glutathion inactive normalement ce métabolite réactif, mais une baisse de ses réserves en dessous du seuil critique de 20 à
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| Tableau 1: Concentration du glutathion (nM/mg prt) au niveau du foie des rats témoins et traités par 100, 200 et 300 mg/kg du paracétamol. |
No.d’échantillon |
Témoin |
Dose minimale |
Dose moyenne |
Dose maximale |
1
2
3
4
5
6
7
8 |
38,44
37,42
41,57
37,27
37,37
37,10
38,08
37,49 |
35,56
36,42
36,78
35,79
36,55
34,10
35,31
34,47 |
34,07
33,63
32,20
33,81
31,71
33,98
31,35
30,88 |
29,19
28,48
25,27
29,31
26,80
29,09
30,00
28,07 |
x ± SD |
38,09 ± 1,47 |
35,65 ± 0,97
(6%) |
32,70 ± 1,31 ** (14%) |
28,27 ± 1,55 *** (25%) |
Les valeurs entre parenthèses représentent les pourcentages de la diminution de la [GSH] par apport au témoin.
** P< 0,01 en comparaison avec le témoin.
*** P< 0,001 en comparaison avec le témoin.
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Tableau 2: Activité de la TGO (UI/l) au niveau du sérum des rats témoins et traités par 100, 200 et 300 mg/kg du paracétamol.
No. d’échantillon |
Témoin |
Dose minimale |
Dose moyenne |
Dose maximale |
1
2
3
4
5
6
7
8 |
38,01
38,62
39,23
38,79
40,98
37,76
34,87
25,61 |
43,87
47,08
44,98
45,81
42,76
43,39
49,09
41,37 |
43,39
50,01
45,46
41,17
49,87
43,29
42,37
47,77 |
46,97
50,61
56,03
51,91
43,85
47,52
52,08
64,71 |
x ± SD |
36,73 ± 4,80 |
44,79 ± 2,48
(18%) |
47,08 ± 3,56
(22%) |
49,46 ± 3,89 *
(25,7%) |
Les valeurs entre parenthèses représentent les pourcentages de l’augmentation de l’activité TGO par apport au témoin.
* P< 0,05 en comparaison avec le témoin.
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Tableau 3: Activité de la TGP (UI/l) au niveau du sérum des rats témoins et traités par 100, 200 et 300 mg/kg du paracétamol.
? d’échantillon |
Témoin |
Dose minimale |
Dose moyenne |
Dose maximale |
1
2
3
4
5
6
7
8 |
39,36
41,68
32,75
38,83
43,90
38,87
40,31
29,64 |
41,69
45,71
39,88
44,93
39,07
41,09
43,91
47,06 |
46,69
48,71
47,87
49,66
47,73
50,51
49,30
48,61 |
60,03
58,58
61,41
54,81
55,53
57,72
52,32
59,39 |
x ± SD |
38,16 ± 4,69 |
42,91 ± 2,8
(11 %) |
48,63 ± 1,2 **
(21,5 %) |
57,47 ± 3,03 *** (33,6 %) |
Les valeurs entre parenthèses représentent les pourcentages de l’augmentation de l’activité TGP par apport au témoin.
** P< 0,01 en comparaison avec le témoin.
*** P< 0,001 en comparaison avec le témoin.
30% de la normale, entraîne une augmentation du toxique libre. Ce métabolite électrophile non conjugué va se fixer par liaison covalente irréversible aux enzymes et amino-acides des protéines vitales de la cellule, et induire l’hépato-cytolyse. Ceci explique l’augmentation de l’activité enzymatique des transaminases sériques (TGO et TGP) (3, 8).
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| Conclusion |
Bien que l’intoxication aiguë au paracétamol reste assez rare, il convient de connaître les conséquences lésionnelles qu’elle est susceptible d’entraîner au niveau hépatique. Le système enzymatique du glutathion joue un rôle de défense très important, car il intervient dans les réactions de conjugaison avec le métabolite toxique du paracétamol (N-acétyl para-benzo quinone imine). Le conjugué métabolite-glutathion est transformé en acide mercapturique soluble et plus facile à éliminer dans les urines (12). Si le surdosage en paracétamol est important, le stock hépatique en glutathion sera épuisé, c’est pour cela, il faut faire recours au traitement par le N-acétyl cystéine, qui reste l’antidote de choix et qui doit être préconisé avant 72 heures afin de neutraliser le N-acétyl para-benzo quinone imine (19). La gravité potentielle hépatique se traduit également par une augmentation de l’activité enzymatique des transaminases (TGO et TGP) (8).
En fin, il faut insister tout d’abord sur la prévention de l’automédication par une meilleure information sur la toxicité, ensuite à l’intérêt d’une prise en charge précoce et efficace.
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| Références |
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| ÇáãÌáÏ 3 , ÇáÚÏÏ 9 , ÑãÖÇä 1426 - ÊÔÑíä ÇáÃæá (ÃßÊæÈÑ) 2005 |
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