| مقدمة Introduction |
لمقايسة الكورتيزول اللعابي محاسن مقارنة مع مقايسة الكورتيزول المصلي، خاصة في مجال البحث وفي التجمعات التي يصعب أخذ عينات المصل منها.
تم في دراسات سابقة تحديد موثوقية ودقة كورتيزول اللعاب ولكن ليس على مدار 24 ساعة، حيث أن تلك الدراسات استعانت بتحليل الارتباط بين كورتيزول اللعاب وكورتيزول المصل لتبرير استخدام مقايسة كورتيزول اللعاب بدلاً من مقايسة كورتيزول المصل، لكن ذلك ليس كافياً، حيث تظهر المساوئ بشكل جلي في الحالات ذات النظم اليوماوي.
تبدي العملية اليوماوية circadian process دورة جيبية انسيابية تبدأ عند مستوى المتوسط وترتفع إلى الذروة peak ثم تنخفض مروراً بالمتوسط إلى الغور trough ثم تعاود الارتفاع إلى المتوسط خلال 24 ساعة تقريباً.
هناك مصطلحات تستخدم في تحليل العمليات اليوماوية هي:
- السعة amplitude: المسافة القصوى من مستوى المتوسط (فوقه أو تحته).
- التواتر frequency: عدد الدورات التي تكملها العملية خلال فاصل زمني معين.
- الدور period: مشتق من التواتر وهو الوقت اللازم لإنجاز دورة واحدة.
- الطور phase: التغيرالمفاجئ بين عمليتين يوماويتين.
الطور والتواتر يحددان أوقات الذروة والغور، وتكون أي عمليتين يوماويتين متزامنتين إذا كان لهما الأطوار والتواترات نفسها.
يمكن أخذ الكورتيزول اللعابي بدلاً من الكورتيزول المصلي إذا كانا متزامنين فقط، ولا يمكن لتحليل الارتباط أن تحدد الاختلافات بين قيم الذروة لعمليتين يوماويتين، وفي ضوء هذه المحدودية في تحليل الارتباط فقد جرى في هذه الدراسة دراسة البنية اليوماوية للكورتيزول اللعابي والمصلي خلال 24 ساعة باستخدام فواصل ساعية.
|
| المواد والطرق Materials and methods |
تمت الدراسة على 9 أفراد أصحاء، ثلاثة منهم ذكور (الأفراد 10، 9، 4)، اثنتان من النساء يأخذن مانعات حمل فموية (الأفراد 5 و 6). متوسط أعمار أفراد الدراسة 28±9.6 سنة.
تم تركيب قثاطر وريدية للأفراد وأخذت العينات كل ساعة بدءاً من التاسعة صباحاً حتى التاسعة صباحاً من اليوم التالي، وأخذت عينات موازية من اللعاب، حفظت عينات المصل واللعاب في الدرجة -70°م إلى وقت إجراء المقايسة. تم تحديد كورتيزول المصل بالمقايسة المناعية الشعاعية وكورتيزول اللعاب بمقايسة مناعية إنزيمية.
|
| النتائج Results |
تراوحت قيم الارتباطات البالغ عددها 25 بين لوغاريتم كورتيزول المصل ولوغاريتم كورتيزول اللعاب من 0.27 إلى 0.91 (المتوسط 0.65). تجاوز معدل الاختلاف في لوغاريتم الكورتيزول اللعابي (0.58)، معدل الاختلاف في لوغاريتم الكورتيزول المصلي(0.43).
تراوحت قيم الارتباطات الطولية التسعة (ضمن الشخص نفسه) بين لوغاريتم كورتيزول المصل ولوغاريتم كورتيزول اللعاب من 0.81 إلى 0.96 (المتوسط 0.91)
تجاوز معدل الاختلاف في لوغاريتم الكورتيزول اللعابي (1.15) معدل الاختلاف في لوغاريتم الكورتيزول المصلي(0.55).
أظهر معظم الأشخاص النظم اليوماوي المتوقع فيما يتعلق بالكورتيزول اللعابي، حيث يساير الكورتيزول اللعابي الكورتيزول المصلي طولياً، إذ كانت قيم الكورتيزول اللعابي والمصلي متزامنة بشكل واضح باستثناء الأفراد 5 و 6.
ويظهر الشكل 1 القيم المشاهدة للوغاريتم الكورتيزول المصلي واللعابي وكذلك قيم الكورتيزول المتوقعة لكل فرد.
تم أخذ العينات بدءاً من الساعة 9 صباحاً (9.00 h) t1= 0 حتى الساعة 9 من صباح اليوم التالي t25= 24 (9.00 h). أظهر معظم الأفراد النظم اليوماوي المتوقع، وكانت مستويات الكورتيزول المصلي واللعابي متزامنة بشكل واضح باستثناء الأفراد 5 و 6.
أظهر كل أفراد الدراسة باستثناء 5 و 6 القمم نفسها وكذلك التواترات والأطوار بين المصل واللعاب. أظهر معظم الأفراد (باستثناء 5 و 6) ودورة كاملة خلال 17-25 ساعة لكل من المصل واللعاب، وأوقات قمة متشابهة تحققت جميعها بين الساعة 2 (11 صباحاً) والساعة 6 (15 بعد الظهر) وكذلك أوقات غور متشابهة تحققت بين الساعة 12 (21 مساءً)، والساعة 17 (2 ليلاً). كانت أوقات القمة والغور متقاربة لكل الأفراد، وهذا يعني أن الكورتيزول اللعابي يمكن أن يكون بديلاً عن الكورتيزول المصلي فقط إذا كانت المستويات متزامنة.
أشارت النتائج إلى أن مقايسات لوغاريتم كورتيزول اللعاب والمصل كانت متزامنة تقريباً.
|
الشكل 1: القيم المشاهدة للوغاريتم الكورتيزول المصلي واللعابي وقيم الكورتيزول المتوقعة لكل فرد.
الدائرة المصمتة: القيمة في المصل. والدائرة المفتوحة: القيمة في اللعاب.
|
| الاستنتاجات Conclusions |
ركزت الدراسة على النماذج الجيبية اليوماوية بين الكورتيزول المصلي واللعابي خلال 24 ساعة في 9 أفراد بالغين.
كانت قيم المصل واللعاب متزامنة وذات قمم متساوية، لذا ففي معظم الحالات فإن كورتيزول اللعاب يمكن أن يمثل كورتيزول
المصل خلال 24 ساعة.
وباستثناء الأفراد 5 و6، فإن التواترات والأطوار والأدوار وأوقات القمة والغور للوغاريتم كورتيزول المصل واللعاب متساوية تقريباً.
إن النموذج اليومي الأقل وضوحاً للكورتيزول المصلي في الحالتين5 و 6 هو نتيجة للقيمة العالية للغلوبولين الرابط للكورتيزول مع مانعات الحمل الفموية وقد تكون هناك تفسيرات أخرى.
تبدو نماذج اللعاب متشابهة تماماً عند اللاتي يستخدمن مانعات الحمل الفموية مقارنة مع اللاتي لا يستخدمنها أو الذكور.
تم في هذه الدراسة فحص إنتاج الكورتيزول غير المنبه. وفيما إذا كان الكورتيزول اللعابي يستطيع قياس الكورتيزول المنبه أم لا يبقى سؤالاً مفتوحاً، ولم تصمم الدراسة لفحص الفيزيولوجيا أو الفيزيولوجيا الإمراضية وإنما لفحص الجوانب التقنية لخطة تحليلية.
أظهرت الدراسة في ضوء هذه الطريقة أن كورتيزول اللعاب مماثل لكورتيزول المصل عند معظم الأشخاص خلال 24 ساعة ، لذا يمكن الاستفادة من هذه الطريقة عند أخذ العينات بعين الاعتبار خلال فترة 24 ساعة.
|
| |
| تأثير الملح البوتاسي للـ EDTA على ثباتية الهرمون الدريقي في الدم الكامل |
| The effect of potassium EDTA on the stability of parathyroid hormone in whole blood |
| ملخص مختار عن مجلة (Ann Clin Biochem 2007;44: 297-299)
|
| مقدمة Introduction |
تستخدم مقايسة الهرمون الدريقي(PTH) parathyroid hormone بشكل رئيسي في حالتين سريريتين، هما التشخيص التفريقي لفرط الدريقات hyperparathyroidism الأولي وفرط كالسيوم الدم hypercalcemia في الخباثة، والمراقبة الروتينية لفرط الدريقـات الثانـوي في مرضـى الكليـة
الخاضعين للمعالجة بالاستعاضة.
إن ثباتية PTH خارج الأحياء أمر مهم، فالعديد من مرضى اضطراب استقلاب الكالسيوم يكونون ضمن المجتمع فتأخذ العينات المراد تحليل PTH فيها حيزاً من الوقت كي تصل إلى المخبر، كما أن عيادات الديال وهي مصدر آخر لطلب PTH، تكون بعيدة عن المخبر أيضاً، يضاف إلى ذلك الوقت الروتيني في المخبر لنقل ومعالجة العينة.
في حين درست سابقاً ثباتية PTH في عينات المصل والبلازما فإن التركيز على ثباتية PTH في الدم الكامل مازال قليلاً رغم أن غالبية العينات التي يتم استلامها في المخبر لا تكون منبذة أو مفصولة لأن قليلاً من العيادات الخارجية أو الأطباء لديهم الوسائل الملائمة لفصل وحفظ العينات.
جرت في هذه الدراسة دراسة ثباتية PTH خلال الوقت في حرارة الغرفة في مجموعتين من الأنابيب؛ إحداهما حاوية على الملح البوتاسي لـ EDTA والأخرى جافة، وذلك لتحديد نموذج العينة الأكثر ملائمة للتحاليل الروتينية لـ PTH في عينات من أماكن بعيدة.
|
| المواد والطرق Materials and methods |
أخذ الدم من 17 مريضاً خلال الفصد الروتيني قبل الديال الدموي، ومن 5 متطوعين أصحاء جُمع الدم على أنابيب EDTA وأخرى جافة، وجرى تنبيذ الأنابيب خلال 30 دقيقة وحفظت البلازما والمصل في الدرجة -20°م حتى إجراء التحليل.
كما عولجت عينات مزدوجة بالطريقة السابقة (فصل وحفظ) بعد 4 و8 و20 ساعة من الفصد. تم اختيار هذه الأزمنة كي تمثل الأوقات المختلفة التي يمكن أن تستغرقها العينة كي تصل من المريض الخارجي أو مراكز رعاية المجتمع.
تمت مقايسة PTH باستخدام عتيدة Bayr Adiva Centaur، ولتجنب التأثيرات الكامنة للفشل الكلوي على استقلاب PTH وعلى ثبات المستقلبات المتفاعلة مناعياً، فقد تم إجراء دراسة محدودة في خمسة شواهد أصحاء حيث أخذت أنابيب الـ EDTA في الساعة صفر والساعة 20 والأنابيب الجافة في الساعة صفر فقط، جرى تكرار المقايسات 5 مرات في هذه المجموعة لتقليل الخطأ الإحصائي.
|
| النتائج Results |
مرضى الكلية: كانت تراكيز PTHالبدئية أعلى بمقدار 7% في الأنابيب الحاوية على EDTA مقارنة مع الأنابيب الجافة، وكان هنالك تناقص واضح في تركيز PTH بعد 8 و 20 ساعة في الأنابيب الجافة، بينما لم يتبدل بشكل يُعتد به في الأنابيب الحاوية على EDTA خلال هذه الفترة.
المتطوعون الأصحاء: كانت تراكيز PTH في أنابيب الـ EDTA مستقلة عن زمن الحضن في كل حالة، وأبدت العينات الأولية المأخوذة على الـ EDTA ارتفاعاً بنسبة 27% مقارنة مع العينات المأخوذة على أنابيب جافة، هذا الارتفاع كان أعلى من الارتفاع المشاهد بين مرضى الكلية.
|
| المناقشة Discussion |
أظهرت الدراسات السابقة أن PTH ثابت في البلازما المأخوذة على الـ EDTAمدة 48 ساعة على الأقل، وأقل ثباتاً في المصل حيث يتناقص بشكل واضح بعد 4 ساعات.
وأظهرت دراستان باستخدام طريقة Immulite، قام بهما كل من Collins و Seth أن PTH ثابت 24 و 48 ساعة على الترتيب. كما أظهر Ellis وزملاؤه أن PTH ثابت في الدم الكامل باستخدام أنابيب EDTA مدة 24 ساعة.
النتيجة الرئيسية للدراسة الحالية هي أن PTH ثابت في الـ EDTA في الدم الكامل 20 ساعة على الأقل في حرارة الغرفة، وأن تراكيز PTH في الـ EDTA كانت أعلى مقارنة مع التراكيز في الأنابيب الجافة، وكان الارتفاع أكثر في المجموعة الشاهدة مقارنة مع مرضى الكلية.
لقد وصفت أشكال ذات حجم صغير، لكنها فعالة حيوياً، من مسقلبات PTH في حالة الفشل الكلوي. وقد يكون الـ EDTA مثبتاً للأشكال الفعالة مناعياً التي تتناقص بشكل نسبي في مرضى الفشل الكلوي، رغم أن ذلك يتطلب دراسات أعمق.
|
| الاستنتاجات Conclusions |
باستخدام مقايسة Bayrفإن PTH ثابت في الدم الكامل 20 ساعة على الأقل في حرارة الغرفة عند أخذ العينات على أنابيب EDTA مقارنة مع 4 ساعات عند أخذ العينات على أنابيب جافة.
إن استخدام أنابيب الـ EDTA يسمح بتحليل عينات من أماكن بعيدة لا يتيسر فيها فصل وحفظ العينات،وذلك دون أي شك في صلاحيتها التحليلية من أجل الاستخدام السريري لمقايسات PTH.
|
| |
