| المجلد 5 ,
العدد 3
, ربيع الثاني 1430 - نيسان (أبريل) 2009 |
| |
| دراسة مستويات ضد التريبسين ألفا 1 المصلية عند الأطفال المصابين بالداء الزلاقي |
| Serum Alpha 1 Anti-Trypsin in Children with Celiac Disease |
| د. إبراهيم خليل*، أ.د. لينا خوري** وأ.د. إميل شاهين* |
| Khalil I; Khoury L. and Shaheen E. |
| *كلية الصيدلة، **مستشفى الأطفال، جامعة دمشق
*Faculty of Pharmacy, **Children Hospital, Damascus University
|
| الملخص Abstract |
هدف الدراسة: الألفا 1 أنتي تريبسين AAT هو مثبط بروتياز يصطنع في الكبد، وتتأثر مستوياته المصلية بعدد من الأمراض المعوية كالإسهال والداء الزلاقي. لذلك كان هدفنا دراسة مستويات ألفا 1 أنتي تريبسين AAT المصلية لدى الأطفال المصابين بالداء الزلاقي ومقارنة نتائج مقايسة AAT باستخدام طريقتين مختلفتين.
المواد والطرق: شملت دراستنا 65 طفلاً، قسموا إلى مجموعتين: مجموعة الأطفال المصابين بالداء الزلاقي (40 طفلاً) والمجموعة الشاهدة (25 طفلاً). تمت مقايسة مستويات AAT بالطريقة العكرية المناعية الآلية وبطريقة الانتشار المناعي الشعاعي.
النتائج: كانت تراكيز ألفا-1 أنتي تريبسين AAT أعلى عند الأطفال المصابين بالداء الزلاقي (130.5 ملغ/دل) منها عند المجموعة الشاهدة (79.6 ملغ/ دل)، وقد لوحظ فارق يعتد به إحصائياً بين مجموعة المرضى والمجموعة الشاهدة المقايسة حيث كانت P<0.05. كما أظهرت الدراسة ارتباطاً بين طريقتي المقايسة (r=0.764 ,P<0.0001).
الاستنتاج: كشفت دراستنا مستويات AAT عالية لدى الأطفال المصابين بالداء الزلاقي مقارنة مع المجموعة الشاهدة، مما يعني إمكان استخدامه كمنبئ للإصابة بالداء الزلاقي. كما أن طريقة قياس العكر المناعية هي المفضلة لأنها دقيقة وسريعة ورخيصة التكلفة.
|
Objective: Alpha 1 Anti-Trypsin (AAT) is a protease inhibitor, synthesized in the liver, many intestinal diseases affect its levels such as diarrhea and celiac disease. Our objective was to evaluate serum AAT levels in children with celiac disease and to compare AAT assay results using two different methods.
Materials and Methods: 65 children were involved in this study, they were divided into two groups: children with celiac disease (n=40) and control group (n=40). AAT levels were measured using two methods; immune turbidimetry and radial immune diffusion.
Results: serum AAT levels were higher in children with celiac disease (130.5 mg / dl) compared to control group (79.6 mg/dl) (p <0.05). the study also revealed correlation between the two methods of assay.
Conclusion: our study revealed high levels of AAT in children with celiac disease compared to control group, so it may be possible to use AAT as a predictor of celiac disease. immune turbidimetry method is preferred.
|
| المقدمة Introduction |
وصف سكولز ألفا 1 أنتي تربسين Alpha-1-antitrypsin (AAT) عام 1955، وأعطي هذا الاسم لاحقاً بسبب تثبيطه للتربسين، وقد أطلق عليه اسم (مثبط البروتياز) بسبب طيفه الواسع في تثبيط البروتيازات وليس فقط التربسين.
AAT سلسلة مفردة متعددة الببتيد مكونة من 394 ثمالة حمض أميني مع ثلاث سلاسل سكرية جانبية، وزنه الجزئي 51 ألفاً، وهو أحد الـسيربينات أو مثبطات بروتياز السيرين التي تتصرف كركازات للمواقع الفعالة لبروتيازات السيرين، وهكذا تثبط فعاليتها الإنزيمية، ثم تشكل معقدات رباعية معها (1).
يثبط AAT معظم بروتيازات السيرين، خاصة تلك المرتبطة بنيوياً بالتربسين، وهو هام فيزيولوجياً كمثبط لإليستاز الكريات البيض والذي يتحرر في عملية البلعمة التي تقوم بها العدلات، ويتفاعل هذا الإنزيم، كما يشير اسمه مع الإيلاستين في بطانة الأوعية، والشجرة الرغامية القصبية، كما قد يكون AAT مثبطاً فيزيولوجياً هاماً لبروتياز العدلات البيض بالإضافة إلى إنزيمات أخرى (2).
على الرغم من وجود بعض التركيب لضد التريبسين ألفا 1 في النسج الموضعية (الوحيدات والبالعات)، فإن كل AAT في البلازما أو المصل تركبه الخلايا البرانشيمية في الكبد. وعمر النصف للـ AAT في البلازما 6–7 أيام.
هناك العديد من الحالات المرضية المترافقة مع زيادة مستويات AAT أو نقصانها، لذا سندرس مستوياته عند المرضى المصابين بالداء الزلاقي.
يتميز الداء الزلاقي Celiac disease، والذي يعرف أيضاً باعتلال الأمعاء الحساس للغلوتين، بإصابة التهابية في مخاطية الأمعاء وهي تنجم عن عدم تحمل مناعي وراثي للغلوتين الوارد مع الغذاء، يتحرض الداء الزلاقي بالأغذية الحاوية على الغليادين مثل القمح والشوفان (3).
ويمكن تحسين الحالة بإتباع حمية خالية من الغلوتين (4). يترافق الداء الزلاقي مع العديد من الأمراض مثل عوز الغلوبولين المناعي A والداء السكري المعتمد على الأنسولين وبعض أمراض المناعة الذاتية.
تعد الحمية الخالية من الغلوتين إلزامية مدى الحياة لمرضى الداء الزلاقي، وذلك لتجنب المشاكل الطويلة الأمد التي يسببها الداء الزلاقي (5، 6).
يتظاهر الداء الزلاقي عند الأطفال عادة بالأعراض الوصفية لسوء الامتصاص (إسهال مزمن - نقص وزن - تطبل بطن) (7)، وفقر الدم هو أهم التظاهرات السريرية للداء الزلاقي، فنصف عدد المرضى المشخصين حديثاً لديهم أعراض وعلامات فقر الدم (8).
ليست الإسهالات المزمنة العرض المسيطر لدى البالغين، بعكس ما هو معروف عند الأطفال، فثلث المرضى فقط يشكون من الإسهال. وهم يصفون برازهم بأنه رخو كالمعجون، كبير الكمية، كريه الرائحة، وبلون مائل للأخضر مع تفاوت واضح في عدد مرات التبرز اليومية (3 - 5 مرات وسطياً).
ويشبه Catassi et al. (9) نسبة المرضى العرضيين بذروة جبل الجليد العائم الذي لا يمثل إلا جزءاً بسيطاً من الحجم الحقيقي.
يعتمد تشخيص الداء الزلاقي عند البالغين على وجود تبدلات تشريحية مرضية وصفية في خزعة الأمعاء مع حدوث استجابة سريرية بعد استبعاد الغلوتين من الطعام (10).
الدراسة النسيجية للأمعاء الدقيقة هي المشعر
الذهبي للتشخيص. ويذهب العديد من المؤلفين
للقول بضرورة إجراء الخزع والدراسة النسيجية بصرف النظر عن نتائج معايرة أضداد الإندوميزيوم (11).
|
| المواد والطرق Materials and Methods |
شملت دراستنا 65 طفلاً قسموا إلى مجموعتين:
- مجموعة الأطفال المصابين بالداء الزلاقي (40 طفلاً) شملت أطفالاً مصابين بالداء الزلاقي، تم تشخيص إصابتهم في مستشفى الأطفال، ومتوسط أعمارهم 7 ± 2.9 سنة.
- المجموعة الشاهدة (25 طفلاً) شملت أطفالاً أسوياء ظاهرياً لا يعانون من أية أعراض متوسط أعمارهم 7±3.2 سنة.
|
| الاعتيان Sampling |
جُمعت العينات في الفترة مابين (1/1/2007 – 16/10/2007) من مراجعي مستشفى الأطفال التابع لوزارة التعليم العالي في دمشق، وجرى جمع معظم عينات المجموعة الشاهدة من أطفال أصحاء لا يراجعون أي مركز طبي.
بُزلت عينات الدم (5 مل دم وريدي على أنبوب جاف) في الفترة مابين الساعة الثامنة والعاشرة صباحاً، ونبذت مباشرة (4000 دورة في الدقيقة مدة 5 دقائق)، ووزع المصل الناتج على أربعة أنابيب إيبندورف، في كل أنبوب 500-300 مكل مصل، باستخدام ممص ميكروي Micropipete، حفظت العينات في الدرجة -80?م إلى وقت إجراء المقايسات، أي حوالي أربعة أشهر كحد أقصى. استخدمت القسيمة الأولى لكل عينة لمقايسة مستويات ألفا 1 أنتي تريبسين بالطريقة الآلية، واستخدمت القسيمة الثانية لمقايسة مستويات ألفا 1 أنتي تريبسين بطريقة الانتشار المناعي.
جرت مقايسة مستويات ألفا 1 أنتي تريبسين AAT بالطريقة الآلية على جهاز هيتاشي 912 الموجود في مستشفى الأسد الجامعي وبعتيدة لشركة روش.
يعتمد مبدأ المقايسة على التحديد الكمي للـ AAT في المصل أو البلازما بقياس العكر المناعي حيث تتفاعل مستضدات الـ AAT الموجود في المصل مع الأضداد المضادة للـ AAT المضافة لتشكيل معقد ضد- مستضد، والذي تقاس درجة عكارته بوساطة مقياس العكر.
وجرت مقايسة مستويات ألفا 1 أنتي تريبسين بطريقة الانتشار المناعي بعتائد خاصة تابعة لشركة بهرينغ Behring، وهي عبارة عن أطباق تحتوي على هلامة الأغاروز المشبعة بأضداد نوعية للألفا 1 أنتي تربسين ويحوي كل طبق على 12 بئراً يمكن وضع عينة في كل واحدة منها (5 مكرولتر).
ومبدأ الطريقة أنه يجري تفاعل بروتين AAT الموجود في العينة (5 مكرولتر)، التي توضع ضمن الفتحة، مع أضداد نوعية لهذا البروتين موجودة ضمن الأغاروز الموجود في الطبق (تفاعل كيميائي مناعي)، يترك الطبق بدرجة حرارة (15 – 25°م) لمدة يومين ومن ثم يقاس قطر الحلقة المتشكلة حول الفتحة نتيجة للتفاعل الحاصل بين الأضداد والمستضدات ويتناسب قطر هذه الحلقة طرداً مع تركيز الـ AAT في المصل.
|
| النتائج Results |
بلغت تراكيز ألفا 1 أنتي تريبسين AAT عند الأطفال المصابين بالداء الزلاقي 130.5 ملغ/دل وعند الأطفال السليمين 79.6 ملغ/ دل (الشكل 1)، وقد لوحظ فارق يعتد به إحصائياً بين مجموعتي المرضى ومجموعة الأطفال السليمين، حيث كانت P<0.05.
وجدنا بدراسة علاقة الارتباط بين تراكيز AAT، بطريقة الانتشار المناعي الشعاعي (RID) والطريقة الآلية على جهاز Hitachi، ارتباطاً إيجابياً يعتد بها إحصائياً حيث كانت r = 0.764 ,P<0.0001 (الشكل 2).
|
| Discussion and Conclusion المناقشة والاستنتاج |
يتراوح المجال الطبيعي لـ AAT بين 120-200 ملغ/ دل (1، 2)، إن الحد الأدنى يختلف من مخبر لآخر، فهو يتراوح بين 70-200 ملغ /دل، ويكون هذا التركيز أقل من 50 ملغ/دل، عند الأشخاص المصابين بالعوز الشديد لـ AAT.
تبين هذه الدراسة النتائج الآتية:
* كانت مستويات ألفا 1 أنتي تريبسين AAT، عند الأطفال المصابين بالداء الزلاقي زائدة مقارنة مع الأطفال السليمين، مما يعني إمكان استخدامه كأحد الواصمات التي يمكن أن توجه إلى تشخيص الداء الزلاقي، خاصة أن تشخيصه يتم بعدة وسائل كتحري أضداد الأندوميزيوم وأضداد الترانس غلوتاميناز.
* الدراسة النسيجية للأمعاء الدقيقة هي المشعر الذهبي للتشخيص في سياق التنظير الهضمي العلوي. توصي الجمعية الملكية البريطانية لأمراض جهاز الهضم بإجراء الخزعة، في جميع الحالات التي يشتبه فيها بوجود الداء الزلاقي، ويؤكد على ذلك (10) David, et al.، ويرى البعض ضرورة إجراء الخزع والدراسة النسيجية بصرف النظر عن نتائج معايرة الأضداد (11) Sinclair, et al..
* بما أننا وجدنا علاقة ارتباط يعتد بها إحصائياً بين قيم ألفا 1 أنتي تريبسين بطريقة الانتشار المناعي والطريقة الآلية، فإننا نوصي باستخدام الطريقة الآلية (التي تعتمد على قياس العكر) في تحديد مستويات ألفا 1 أنتي تريبسين عند توفرها لأنها تتميز بما يلي: أكثر دقة، وأسرع إنجازاً، وأقل كلفة. |
 |
| المراجع References |
1-Stockley RA.
The pathogenesis of chronic obstructive lung diseases implications for therapy.
Q J Med; 88: 141-146, 1995.
2-Sandhaus RA.
Elastase may play a central role in the neutrophil migration through connective tissue. In: Taylor JC, Mittman C, editors. Pulmonary emphysema and proteolysis.
Orlando, FL: Academic Press; 227-233, 1997.
3-Bethesda MD.
Celiac Disease, National Digestive Diseases Information Clearing house.
NIH Publication No.03, 4269, 2003.
4-Jax Peters Lowell.
Celiac Disease, American Academy of Family Physicians, 2001.
5-Troncone R; Greco II; Auricchio S
Gluten-Sensitive Enteropathy.
Pediatr Clin North Am, 43: 2, 355-373, 1996.
6-Holmes GKT
Potential and latent celiac disease.
Eur J Gastroentreol Hepatol, 13: 1057-1060, 2001.
7-Iovino P; Ciacci C. and Sabbatini F.
Esophageal impairment in adult celiac disease with steatorrhea.
Am J. Gastroenterology. 93, 1243-1249, 1998.
8-Fine KD.
The prevalence of occult gastro intestinal bleeding in celiac sprue.
N. Engl J. Med; 334: 1163, 1996.
9-Catassi C; Ratsch IM. and Fabiani E.
Celiac disease. In the year 2 exploring the iceberg.
Lancet, 343: 200-203, 1994.
10-David A. and Nelsen JR.
Gluten-sensitive enteropathy (Celiac Disease): More common than you think.
Journal of the American Academy of Family physicians. 2002.
11-Sinclair D; Pearce CB. and Saas MS.
A comparative study of tissue transglutaminase antibodies and endomysium - antibody immuno fluorescence in routine clinical laboratory practic.
Ann clin biochem; 40: 411-416, 2003.
|
| |
| المجلد 5 ,
العدد 3
, ربيع الثاني 1430 - نيسان (أبريل) 2009 |
|
|
|
