| الملخص Abstract |
تهدف هذه الدراسة إلى تحديد القيمة المصلية للانترلوكين 8 لدى المرضى المصابين بالأمراض القصبية: الربو (تحسسي)، والمرض الرئوي الانسدادي المزمن COPD (غير التحسسي)، ولقد أثبتنا ناحيتين اثنتين:
1- زيادة الانترلوكين 8 لدى المرضى المصابين بأمراض قصبية؛
2- الزيادة المحتملة لقيم IL 8، والتي تدفع بالمحلل إلى تشخيص غير متوازن للمرض النوعي.
أجري قياس التركيز المصلي للانترلوكين 8 بطريقة المقايسة المناعية الإنزيمية (ELISA)، ولقد جرى توزيع المرضى ضمن مجموعات خمس:
مجموعة من مرضى الهجمة الحادة من الربو الشديد (31 مريضاً)، ومجموعة من مرضى الهجمة الحادة من الربو المتوسط إلى الخفيف (33 مريضاً)، ومجموعة من مرضى فترة السورة من الداء الرئوي الانسدادي المزمن (22 مريضاً)، ومجموعة من مرضى فترة الهدأة من الـ COPD (32 مريضاً)، ومجموعة شاهد (34 شخصاً سليماً).
كان هنالك ارتفاعاً واضحاً في قيم تركيز الانترلوكين 8 لدى كل من مرضى الربو والـ COPD وذلك بالمقارنة مع المجموعة الشاهدة، وكانت قيم IL 8 أعلى ومشخصة أكثر لدى مرضى COPD منها لدى مرضى الربو.
|
The study aims to determine the clinical value of serum interleukin 8 involved in patients with bronchial diseases: asthma (allergic), chronic obstructive pulmonary disease COPD (no allergic), we confirmed two things:
1-Increase of serum interleukin 8 in the patients with bronchial diseases.
2-The different increase of values of IL8, which lead the analyzer to overbalance diagnosis of specific disease.
We measured the serum concentration of interleukins 8 by ELISA method, the patients had been divided to five groups: Acute attack of sever asthma (31 patients), Acute attack of moderate asthma (33 patients), Exacerbation of chronic obstructive pulmonary disease (22 patients), Out Exacerbation period of COPD (32 patients), and Control (34 healthy subjects).
There was obvious raise in concentration values of IL8 of both asthma and COPD patients, comparing with control; IL8 values were higher and more diagnostic in COPD than asthma.
.
|
| المقدمة Introduction |
تزايد ظهور الأمراض القصبية في الآونة الأخيرة، وخاصة الأمراض القصبية المزمنة، حيث تلعب الأسباب الوراثية والبيئية دوراً كبيراً في ذلك. يعد الربو من الأمراض القصبية المزمنة الخطيرة التي من الممكن أن تسبب الوفاة، يصيب أكثر من عشرة ملايين شخص في الولايات المتحدة، كما يسبب الربو انسداداً عكوساً للطرق الهوائية جزئياً أو كلياً يترافق مع حدوث فرط استجابة القصبات تجاه المحرضات المتنوعة.
بينما يعد المرض الرئوي الانسدادي المزمن (COPD)Chronic Obstructive Pulmonary Disease مرضاً التهابياً قصبياً خطيراً وهو السبب الثامن المؤدي للوفاة حسب مؤشر DALYS (سنوات الحياة المعدلة حسب عدم القدرة)، ويسبب هذا المرض انسداد الجريان الهوائي، الذي يكون غير عكوس بشكل كامل ومترافق مع استجابة التهابية غير سوية للرئتين تجاه الجزيئات السامة أو الغازات (1).
تعد الانترلوكينات من العوامل الهامة في الشلال الالتهابي الذي يحدث في الآلية الإمراضية والذي يسبب التظاهرات المرضية المعروفة لكل مرض. وهنالك انترلوكينات معينة يمكن تصنيفها حسب وظيفتها إلى انترلوكينات داعمة للالتهاب pro inflammatory ILs وأخرى مضادة للالتهاب anti inflammatory وثالثة تعد عوامل نمو، وانترلوكينات تشكل ما يدعى بالكيموكينات وهي عوامل الجذب الكيميائي للخلايا الالتهابية. إذاً تعد الانترلوكينات هامة جداً في الحدثية الالتهابية والحفاظ عليها ودوامها، ليس هذا فقط، فهي جوهرية أيضاً في إطلاق الشرارة الالتهابية المبكرة (9). هنالك انترلوكينات محددة تلعب الدور الأساسي في الأمراض القصبية، لذلك من الطبيعي أن نجد ارتفاعاً واضحاً في معدلات تراكيزها المصلية لدى الأشخاص المصابين بالمرض أو حتى في السائل السنخي القصبي BAL (bronchial alveolar lavage) المستخرج منهم أو في القشع المحدث.
لكن تباين ارتفاع التراكيز بين مرض وآخر
يقدم إمكاناً أكبر للتشخيص التفريقي، حيث يستطيع من خلاله المخبري والطبيب رسم خريطة تشخيصية دقيقة أو أقرب إلى الدقة وبالتالي تحديد الأساليب والخطط العلاجية المناسبة لكل مرض دون الحاجة إلى الجمع بين عدة وسائل علاجية للوصول إلى الاستشفاء السريع والإسعافي، حيث أن إضافة مضاد حيوي لمريض ربو في مرحلة هجمة حادة إسعافية داخل مستشفى لن تفيد في ما إذا كان هنالك شك بأن لديه عوارض COPD، كما أن إعطاء مريض انسداد رئوي مزمن كورتيكوستيروئيدات فموية أو استنشاقية بشكل دائم لن يفيد في حال الشك بوجود عوارض ربوية.
في هذا البحث تمت مقايسة الانترلوكين 8 والذي يعد عامل الجذب الكيميائي الأهم للخلايا الالتهابية (4-6).
|
| المواد والطرق Materials and Methods |
أجريت المقايسة لمجموعات الدراسة الخمس:
• المجموعة الأولى، وهي مجموعة مرضى الربو الشديد أثناء الهجمة الحادة وبلغ عددهم 31 مريضاً مشخصاً إصاباتهم بالربو من قبل أطباء الداخلية والإسعاف في مستشفى المواساة، وتراوحت أعمارهم بين 23 و68 عاماً.
• المجموعة الثانية، وهي مجموعـة مرضى
الربو الخفيف إلى المتوسط أثناء الهجمـة
الحادة وبلغ عددهم 33 مريضاً مشخص لهم الربو من قبل العيادة الصدرية في مستشفى دمشق، وتراوحت أعمارهم بين 19 و71 عاماً.
• المجموعة الثالثة، وهي مجموعة مرضى الانسداد الرئوي المزمن أثناء فترة السورة وبلغ عددهم 22 مريضاً مشخصاً لهم المرض من قبل أطباء قسم الإسعاف في مستشفى المواساة، وتراوحت أعمارهم بين 48 و77 عاماً.
• المجموعة الرابعة، وهي مجموعة مرضى الانسداد الرئوي المزمن، في فترة النقاهة، ما بعد السورة مباشرةً وبلغ عددهم 32 مريضاً مشخصاً مرضهم من قبل أطباء قسم الداخلية في الشعبة الصدرية، في مستشفى المواساة، وتراوحت أعمارهم بين 41 و73 عاماً.
• المجموعة الخامسة، وهي مجموعة الأسوياء وبلغ عددهم 34 شخصاً من الأسوياء ظاهرياً، لا يعانون أية إصابة التهابية أو تحسسيه أو طفيلية، حيث أن الإصابات السابقة تؤثر على المعالم المدروسة وأعمارهم موافقة لأعمار المرضى بين 18 و77.
مع ملاحظة أن التشخيص المرضي جرى بناءً على المعايير السريرية المتبعة في التشخيص من قبل الأطباء.
تم جمـع العينات من الـدم الوريدي، وكان
يؤخذ في كل مرة 5 مل يوضع في أنبوب جاف ينبذ مباشرةً، بسرعة 1500 دورة في الدقيقة، لمدة 10 دقائق بحرارة 20°م، ثم يؤخذ المصل ويوزع على أربع عبوات إيبيندروف ويحفظ بالدرجة -80°م لإكمال الاختبارات عليها لاحقاً.
جرت مقايسة الانترلوكين 8 بطريقة الامتزاز المناعي المرتبط بالإنزيم ELISA باستخدام عتيدة Kit شركة Diaclone الفرنسية.
تعتمد المقايسة على مبدأ الامتزاز المناعي المرتبط بالإنزيم بطريقة الشطيرة بالطور الصلب solid phase sandwich Enzyme Linked Immuno Sorbant Assay (ELISA)، حيث تبطن الآبار بأضداد وحيدة نسيله نوعية للـ IL8، تضاف العينات بما فيها العياريات ذات التراكيز المعروفة والشواهد وعينات المصل لهذه الآبار بوساطة الممص الصغري، وبذلك يضاف مستضد الـ IL8 إلى الآبار وتترك لفترة حضانة أولى بعدها يجري الغسل، من ثم تضاف أضداد وحيدة نسيلة نوعية موسومة بالبيوتين وتترك لفترة حضانة ثانية، بعد ذلك يضاف إنزيم streptavidin-peroxydase ويجري الحضن الثالث، ثم الغسل لإزالة الإنزيم غير المرتبط، يضاف بعده محلول الـ substrate الذي يعمل على الإنزيم المرتبط ليسبب منتج تفاعلي ملون تتناسب كثافته اللونية طرداً مع تركيز الـ IL8 المتواجد في العينات ويمكن قياسه كمياً.
وعولجت النتائج كما يلي:
1- جرى التعبير عن القيم المختلفة بحساب المتوسـط الحسابي والانحراف المعياري
ومجال القيم لكل مجموعة؛
2- اعتمد اختبار T student لتحديد الفارق بين المتوسطات؛
3- اعتمد معامل Pearson لدراسة علاقة الارتباط بين المجموعات؛
4- اعتمد P<0.0001 للدلالة الإحصائية؛
ولقد شملت الدراسة بشكل عام 118 مريضاً و34 شخصاً سليماً.
|
| النتائج Results |
| حددت قيمة المتوسط الحسابي للـ IL8 للمجموعة الشاهدة وقورنت مع المتوسط الحسابي لقيم الانترلوكين 8 التابعة لمجموعات الدراسة المرضية الأربع مع حساب الانحراف المعياري في كل مرة، كانت النتيجة ملاحظة ارتفاع واضح لقيم الـ IL8 للمجموعات المرضية عن المجموعة الشاهدة، كما يُلاحظ في الشكل 1، ثم جرى إنشاء مخططات علاقات الارتباط لمعرفة معامل الارتباط للمعلم الالتهابي المدروس، وهو الـ IL8 مع الحالات السريرة المدروسة، والأشكال 2 و 3 تمثل ذلك.
توافقت الدراسة مع دراسة Nocker وزملائه في دراسة تمت في كاليفورنيا عام 1995 (8)؛
كما توافقت مع نتائج Angshu وزملائه في
دراسـة تمت في لندن عام 2000 (1)؛ كما
توافقت مع نتائج Yamamoto وزملائه في اليابان عام 1997 (12).
|
| المناقشة Discussion |
* يمكن ملاحظة أن قيم الـ IL 8 مرتفعة عند المجموعات المرضية مقارنة مع الأسوياء. كما أن ارتفاع الـ IL8 لدى مرضى الـ COPD
كان مميزاً أكثر مما هو عند مرضى الربو.
* يمكن ملاحظة وجود ارتباط ضعيف بين تراكيز الـ IL8 في حالة سورة الـ COPD والربو المتوسط إلى الخفيف، بينما لا توجد أية علاقة بين السورة والربو الشديد، وهذا ما يدفع إلى اعتبار الـ IL8 معلماً تفريقياً بين الربو والانسداد الرئوي المزمن في مرحلة السورة.
|
الشكل 1: قيم تراكيز IL8 المصلية لدى مجموعات المرضى:
|
1- الربو الشديد التحسسي الهجمة الحادة
2- الربو الشديد القصبي الهجمة الحادة
3- الربو الشديد المهني الهجمة الحادة
4- الربو متوسط الشدة التحسسي الهجمة الحادة
5- الربو متوسط الشدة القصبي الهجمة الحادة
6- الربو المتوسط الشدة المهني الهجمة الحادة
7- الـ COPD مرحلة الهدأة
8- الـ COPD مرحلة السورة.
9- الأسوياء
|
الشكل 2: الارتباط بين تركيز IL8 لدى مجموعة الربو الشديد والمستمر ومجموعة سورة الـ COPD .
الشكل 3: الارتباط بين قيم تراكيز IL8 لدى مجموعة مرضى الربو المتوسط إلى الخفيف ومجموعة مرضى سورة COPD .
|
تلعب الانترلوكينات دوراً هاماً في العملية الالتهابية ودوامها، كما لاحظنا ارتفاعاً في تركيز IL8 من خلال الدراسة وخاصةً أثناء المرحلة الحرجة من المرضين، كما لوحظ اختلاف هذا الارتفاع والذي يمكن أن يساعدنا في تأكيد التشخيص، وخاصةً عند المرضى الذين ليس لديهم صورة سريرية مثالية وواضحة، وتتجلى أهمية ذلك عندما تكون الحالة اسعافية. كما يمكن استعمال هذا الارتفاع في التركيز في متابعة الحالة المرضية، وتحديد درجة الإمراضية، ومراقبة سير المرض مع الموجودات السريرية والمخبرية الأخرى وبالتالي إمكان تعديل البرنامج العلاجي والجرعات (3).
إذاً نوصي بـ:
- قياس الانترلوكين 8 باعتباره معلم هام في التشخيص التفريقي بين الربو بكافة أنماطه والـ COPD في مرحلة السورة.
- توسيع الدراسة لتشمل مقايسة انترلوكينات أخرى، وإجراء المقايسة أيضاً في السائل السنخي القصبي BAL لأن القيم المستخرجة ستكون أكثر تعبيراً وتمييزاً للمرض (5).
|
| المراجع References |
1-Angshu Bhowmik, terence A. seemungal and Raymond J. sapsford
Realation of sputum inflammatory markers to symptoms and lung function changes in COPD exacerbation.
Thorax, 2000.
2-Caroline Kampf
Effects of Th-1 and Th-2 Cytokines and Reactive Oxygen Species on Normal Human Bronchial Epithelial Cells.
Acta Universitatis Upsaliensis Uppsala. 2001.
3-Charles A. Janeway, Paul Travers, Mark Walport and Mark Shlomchik
Immunobiology part v. The Immune System in Health and Disease.
Allergy Hypersensitivity. Garland publishing. 2001.
4-Collins PD; Griffiths-Johnson DA. and Jose PJ.
Co-operation between interleukin-5 and the chemokine, eotaxin, to induce eosinophil accumulation in vivo.
J Exp Med, 182: 1169-1174, 1995.
5- Yamamoto C; Yoneda T; Yoshikawa M; Fu A; Tokuyama T; Tsukaguchi K. and Narita N.
Airway inflammation in COPD assessed by sputum levels of interleukin-8.
American College of Chest Physicians, 1997.
6-Hamid Q; Azzawi M. and Sun Ying.
Expression of mRNA for interleukin-5 in mucosal bronchial biopsies from asthma.
J Clin Invest; 87: 1541-1549, 1991.
7-Chung KF. and Barnes PJ.
Role of Chemokinesin asthma. Cytokines in asthma.
Thorax; 54: 825-857, 1999.
8-Nocker schoonbrood and van de graaf
Interleukin8in airway inflammation in patients with asthma and chronic obstructive pulmonary disease.
Arsh Allergy immunol, 1995.
9-Stamenkovic I.
Extracellular matrix remodelling: the role of matrix metallo-proteinases.
J Pathol, 200: 448-464, 2003.
10-Stephen I. Wasserman
Allergic Diseases.
5th Edition. Biochemical Mediators of Allergic Reactions. Roy Patterson, Leslie Carrol Grammer, and PaulA. Greenberger. Lippincott-Raven Publishers.
Philadelphia, 49-57, 1997.
11-World Health Organization.
The GOLD global strategy for the management and prevention of COPD.
Accessed February 26, 2003.
|
| |
