| الأهداف |
مراقبة الجودة بهدف التحقق من:
- دقة وكفاءة تقنية اختبارات التحسس.
- أداء الكواشف المستعملة في الفحوص.
- أداء المخبريين.
ولكي يتم التحقق من هذه المتطلبات، هناك عدة
سلالات جرثومية مرجعية قابلة للاستخدام (الجدول 1).
إجراءات المراقبة:
يجب أن تجرى مراقبة الجودة بشكل مستمر على كل دفعة جديدة من مستنبت مولرهينتون والمضاد الحيوي.
|
الجدول 1: السلالات الجرثومية المرجعية.
الايشريكية القولونية |
Escherichia coli ATCC 25922 |
الايشريكية القولونية |
Escherichia coli ATCC 25218 |
الكلبسيله الرئوية |
Klebsiella pneumonia ATCC 700605 |
الزائفة الزنجارية |
Pseudonorous aerurginosa ATCC 27853 |
العنقوديات الذهبية |
Staphylococcus aureus ATCC 25923 |
العنقوديات الذهبية |
Staphylococcus aureus ATCC 43300 |
العنقوديات الذهبية |
Staphylococcus aureus ATCC 43866 |
العنقوديات الذهبية |
Staphylococcus aureus ATCC 29213 |
المكورات المعوية |
Enterococcs faecalis ATCC 29212 |
المستدميات النزلية |
Haemophilus influenzae ATCC 49247 |
النايسيرية البنية |
Neisseria gonorrhoeae ATCC 49226 |
العقديات الرئوية |
Streptococcus Pneumoniae 49619 |
|
السلالات المرجعية التي يجب أن تفحص هي:
الايشريكية القولونية |
E.coli ATCC 25922 |
العنقوديات الذهبية |
S.aureus ATCC 25925 |
الزائفة الزنجارية |
P.aeruginosa ATCC 27853 |
العقديات الرئوية |
S.pnemoniae ATCC 49619 |
المستدميات النزلية |
H.influenzae ATCC 9247 |
|
يوصى بتعيين شخص مسؤول للإشراف على مراقبة الجودة في كل مختبر.
تفحص هذه السلالات مرة واحدة في الأسبوع بالشروط العملية نفسها الموصوفة للجراثيم المعزولة.
ومع ذلك يمكن أن تضم سلالات أخرى ضمن نظام المراقبة ويترك انتقاؤها إلى تقدير الاختصاصيين في علم الجراثيم ويؤخذ بالاعتبار اختبار التحسس للمضادات الحيوية المستخدم.
يجب إجراء تحليل شهري (يمكن أن يجرى التحليل عبر برنامج Whonet) لمجموع فحوص مراقبة الجودة للجزيئات وللتقنيين، وإذا كانت النتائج غير مرضية يجب مراقبة كل من:
1) قراءة وتفسير أقطار مناطق التثبيط والتعبير عن النتيجة؛
2) وسط الزرع (المستنبت)؛
3) الزرعات وكميتها؛
4) أقراص المضادات الحيوية؛
5) السلالات المرجعية.
يجب أن تطبق مراقبة الجودة على التقنيينالعاملين جميعهم دون استثناء.
|
| 1- القراءة والتفسير: |
يجب أن تجرى قراءة اختبار التحسس بمساعدة مسطرة دقيقة.
o لتفادي الأخطاء الناتجة عن اختلاف زاوية الناظر قدر المستطاع، يجب إبقاء جهاز القياس عمودياً على المحور البصري.
o يجب قراءة الأقطار من الوجه الداخلي لطبق مولرهينتون مع الدم. (للجراثيم العطوبة كالنايسيريا والمستدميات).
o يجب قراءة الأقطار في الزروع الاعتيادية من خلف طبق مولرهينتون.
o يجب التأكد من أن النتائج (S, I, R) مرتبطة بالأقطار المقاسة بصورة جيدة.
o يجب قياس أقطار التثبيط بعناية ودقة وتقارن بالقيم الحرجة.
إن الأسباب الثلاثة الأساسية للأخطاء الشائعة هي:
1- عدم الضبـط الجيـد لكميـة الجراثيـم
المزروعة.
2- الفرش غير المتجانس للمستحلب الجرثومي على غراء مولرهينتون.
3- قياس خاطئ لأقطار هالات التثبيط.
|
| 2- ضبط الوسط: |
قيمة الباهاء pH:
¤ يجب أن تتراوح درجة حموضة الوسط بين 7.2 و 7.4 ويجب ضبط الـ pH لكل دفعة جديدة محضرة لمولرهينتون بمقياس الـ pH لأن تبدلات الـ pH ستؤثر على فعالية الأمينوزيدات والماكروليدات والفينيكولات.
¤ يتم غمس المسبار في قارورة مولرهينتون نصف السائلة (يجب الانتباه لأن هناك خطورة من انفجار المسبار إذا كانت الحرارة مرتفعة جداً).
¤ يجب أن يتصلب الغراء حول حواف المسبار، وعند هذه اللحظة بالذات تؤخذ الـ pH.
تحضير العلب:
يصب غراء المولرهينتون في أطباق بتري المعقمة، الموضوعة على سطح طاولة أفقيةً، من أجل السماح بتوزع متجانس للغراء بثخن 4 ملم (الذي يتوافق مع كمية 20 مل من مولرهينتون موزعة على أطباق بتري ذات أقطار 90 ملم).
الرطوبة:
يجب أن تكون العلب مجففة بشكل جيد قبل الزرع.
تركيز التيميدين أو التيمين:
- يؤدي التركيز الزائد جداً من التيميدين إلى إنقاص أقطار هالات التثبيط حول أقراص السلفاميدات والتريميتوبريم.
- لهذا يجب فحص وسط مولرهينتون بسلالة مرجعية من E.Faecalis ATCC 29212
وعندها يجب أن يشاهد قطر تثبيط أكبر أو يساوي 20 ملم حول قرص التريميتوبريم/ سلفا ميتوكسازول.
* تركيز الأيونات الموجبة:
- إن التركيز الزائد جداً من الأيونات (Ca+2 و Mg+2 بشكل أساسي) يؤهب لتقلص مناطق التثبيط للأمينوغليكوزيدات (المفحوصة للـ P. aeruginosa)، ومنه فإن التراكيز الناقصة تعطي مناطق تثبيط كبيرة جداً.
- إن أيونات Zn+2 تؤثر على فعالية الكاربابينيم.
- يجب أن تكون هذه التراكيز: للكالسيوم 50-100 ملغ/ لتر. للمغنيزيوم 20-35 ملغ/ لتر.
|
| 3- ضبط الزرعات: |
¤ نحضر معيار 0.5 ماكفارلاند بوضع 0.5
مل من محلول BaCl2 المائي 1% (10غ/ ل) في أنبوب 100 مل، نكمل الحجم إلى 100 مل بإضافة H2SO4 1% (10 مل/ ل). والمحلول المحضر بهذه الطريقة يجب أن تكون كثافته الضوئية A بين 0.08 و 0.1 مقروءة في موجة طولها 625 نانومتر.
¤ نقسم المحلول إلى أحجام 10 مل على أنابيب تماثل تلك التي نستخدمها لاستحلاب المستعمرات المرضية في تحضير الزرعات (يكون عدد الأنابيب تابع لعدد العاملين).
¤ نغلق الأنابيب بطريقة تمنع أي تبخر (بارا فيلم، رباط، لاصق).
¤ نضع علامة على المستوى الذي وصل له السائل ونضبطه بشكل دوري بقياس كثافته الضوئية.
¤ نحفظ الأنابيب بدرجة حرارة المحيط بالظلام (بوضع ورق ألمنيوم).
¤ نجانس الأنبوب المعيار قبل مقارنته مع الزرعات المحضرة بمزجه على المازجة Vortix.
¤ أي يجب أن يكون للزرعات والمعياري شدة العكر نفسها، عندما يتم فحصهم عيانياً على خلفية مخططة.
¤ يفضل استخدام مقياس الكثافة.
|
| 4- أقراص المضادات الحيوية: |
• يجب التحقق من تاريخ الانتهاء قبل استخدام أي قرص من المضادات الحيوية، خصوصاً بالنسبة لمضادات البيتالاكتام، وكذلك يجب التحقق من كمية المضاد الحيوي في القرص.
• يجب أن يتم تخزين خراطيش للمضادات الحيوية في درجة حرارة -20?م ويجب أن تكون مغلقة بإحكام. وتحفظ الخراطيش التي بدئ باستعمالها بدرجة حرارة البراد +4?م.
• كل الأقراص الرطبـة أو التي تقـع على
تماس مباشر مع الزجاج أو التي تركت في درجة حرارة الغرفة، يجب ألا تستخدم إلا إذا تم التأكد من صلاحيتها بالمقارنة مع أقراص نظامية محفوظة.
• يجب أن يتم إخراج الخراطيش من الثلاجة قبل الاستعمال بـ 1-2 ساعة.
|
| 5- السلالات المعيارية: |
منذ استلام السلالات المعيارية، يجب أن تعزل على وسط مناسب وهو عبارة عن غراء مغذ نظامي يكفي للجراثيم الاعتيادية (أنظر الجدول 1).
انطلاقاً من هذا المستنبت ننفذ 12 مستنبت يجمد في درجة حرارة -70?م.
نأخذ كل شهر أحد الأنابيب من كل سلالة ونخرجه من التجميد ونقوم بفحصه.
نأخذ بمساعدة الماسحة بطريقة التثليم على سطح المستنبت المجمد مع الحرص على عدم إذابته.
نعيد تنفيذ 12 مستنبتاً مجمداً للعام القادم انطلاقاً من الأنبوب الثاني عشر المحفوظ.
إن القيم الحرجة للسلالات المعيارية للمضادات الحيوية المفحوصة مدرجة في الجدول 3.
|
طريقة الحفظ |
الملاحظات |
تجفيد |
حفظ طويل الأمد |
تجميد بدرجة -70م |
حفظ طويل الأمد |
بعمق الغراء |
زرع نظامي للسلالات |
|
| - في حال عدم توافر مجمدة أو مجفدة نستطيع القيام بالزرع باستخدام أنبوب غراء مائل، يتم حضنه مدة 24 ساعة ثم يحفظ بدرجة حرارة - 20?م. تستخدم هذه التقنية لحفظ المكورات الرئوية لمدة 6 أشهر. |
| 6- يتم تطبيق التقييم الخارجي للجودة منذ عام 1999 على المختبرات التابعة لشبكة مراقبة المقاومة للمضادات الحيوية.
يستطيع كل علماء الجراثيم الراغبين في المشاركة بهذه المراقبة التسجيل في مختبر علم الجراثيم الطبي والمعالجة الحيوية المضادة وصحة المستشفى التابع لمعهد باستور الذي يعد المسؤول عن مراقبة ظهور المقاومة الجرثومية للمضادات الحيوية على المستوى الوطني. ويوضح الشكل التالي بقسميه A و b خطوات ضبط جودة الزرع الجرثومي.
|
|
|
|
|
| |
