| الملخص Abstract |
هدف الدراسة: تهدف هذه الدراسة إلى إجراء مقارنة بين اختبارين تشخيصيين للعدوى بالمَلْوِيَّة البَوَّابية، إحداهما باضع والثاني غير باضع. ومن ثم اختيار الطريقة الأفضل والملائمة لتشخيص المَلْوِيَّة البَوَّابية لدى المرضى الخارجيين المثبت لديهم قرحة هضمية بوساطة التَنْظيرٌ الداخِلِيّ والمراجعين لمستشفى حلب الجامعي.
المواد والطرق: شملت الدراسة 50 مريضاً بالغا تتراوح أعمارهم بين 18-80 عاماً، 36 ذكراً و14 أنثى. خضع كل مريض لاختبار الزرع الجرثومي بأخذ خزعة من غار المعدة عند إجراء التَنْظيرٌ الداخِلِيّ. ومن ثم أُجري اختبار كشف المستضد في البراز بأخذ نَمُوْذَج براز من المريض ذاته بعد إجراء التَنْظيرٌ الداخِلِيّ.
النتائج: كان هناك توافق بين نتيجة الاختبارين بنسبة 62% واختلاف بينهما بنسبة 38%. لم يلاحظ وجود ارتباط إحصائي يُعتد به بين الزرع الجرثومي واختبار كشف المستضد في البراز (P=0.09).
الاستنتاج: يجب تطبيق كلا الاختبارين لاكتشاف دور المَلْوِيَّة البَوَّابية في القرحة الهضمية وعدم الاكتفاء باختبار واحد.
|
Objective: This study aims to compare between two diagnostic tests of Helicobacter pylori infection, one of them is invasive and the other is non-invasive. and then to choose the appropriate and the best method for diagnosis of Helicobacter pylori in out-patients whom they approved that they have peptic ulcer by endoscopy in Aleppo hospital.
Materials and Methods: The study included 50 adult patients with age range between 18-80 years, 36 male &14 female. Each patient was subjected to bacterial culture test by taking biopsy from gastric antrum during endoscopy and then subjected to Stool antigen test (HPSAg) by taking stool specimen from same patient after endoscopy.
Results: The similarity between the results of both tests was 62% and the difference between them was 38%. It was found that there was no significant statistic correlation between bacterial culture and stool antigen test (P=0.09).
Conclusion: We must apply both tests for detection of the role of Helicobacter pylori in peptic ulcer and don’t depend on only one test.
|
| المقدمة Introduction |
تعد المَلْوِيَّة البَوَّابية العامل المسبب لالتهاب المعدة والقرحة الهضمية (1-2). وتتصف هذه الجراثيم بأنها عصيات صغيرة حلزونية الشكل سلبية الغرام، تتراوح أبعادها بين 0.5-1 مِكْرون عرضاً و2-4 مِكْرون طولاً، عديمة المحفظة وغير مولدة للأبواغ (3).
هذه الجراثيم محبة قليلاً للهواء، لذا يتطلب نموها نسبة من الأكسجين تتراوح بين 2-5% (4). يمكن تقسيم طرق التشخيص الخاصة بالإصابة بهذه الجرثومة إلى طرق باضعة؛ أي بحاجة لأخذ خزعة من غار المعدة، أو غير باضعة. نذكر من الاختبارات الباضعة الزرع الجرثومي الذي يتطلب أخذ خزعة من غار المعدة عند إجراء التنظير الهضمي، كما نذكر من الاختبارات غير الباضعة اختبار كشف المستضد في البراز الذي يتطلب أخذ عينة براز من المريض ذاته بعد إجراء التنظير.
|
| المواد والطرقMaterials and Methods |
المرضى والاعتيان:
أُجريت هذه الدراسة بين شهري أيار 2011 وتشرين الأول 2011، وتناولت 50 مريضاً يعانون من آلام شرسوفية وثبت لديهم وجود قرحة هضمية (معدية أو عفجية)، بعد إجراء التنظير الهضمي في مستشفى حلب الجامعي، تراوحت أعمارهم بين 18- 80 عاماً، كان منهم 36 ذكراً و14 أنثى. أجريت الدراسة في مخابر كلية الصيدلة/ جامعة حلب، وأُخذت العينات التالية لكل مريض في الدراسة:
1- خزعة من مخاطية المعدة: أُخذت خزعة من غار المعدة وحفظت في أوساط ناقلة خاصة (أوساط portagerm pylori)، من إنتاج شركة Biomeriux الفرنسية، أثناء نقلها إلى المختبر، حيث يؤمن هذا الوسط الشروط اللازمة لعيشوشة هذه المتعضيات وهو يحتوي على أساس بيبتون ضمن دارئة وعناصر زهيدة مفضلة لنمو الجرثومة ومزيج من المضادات الحيوية للحد من نمو المتعضيات الأخرى الموجودة في نَبيت flora البلعوم والفم والتي يمكن أن تنتقل خلال التنظير.
2- عينة براز: جمع البراز في عبوات عقيمة، حُفظت في المجمدة إلى حين إجراء الفحوص عليها.
الزرع الجرثومي
طريقة العمل: تُخرج الخزعة من الوسط الناقل، وتُسحق جيداً مع قليل من المصل الفيزيولوجي، ومن ثم تُزرع على أوساط انتقائية جاهزة (H. PYLORI) من إنتاج شركة Biomeriux الفرنسية. يوضع طبقان من أطباق الزرع ضمن الكيس الحاضن ويضاف إليه كيس مولد للغاز، من شركة Biomeriux الفرنسية، من أجل محيط أَليفُ الهَواءِ القَليل microaerophilic خلال حضن الأوساط الزرعية. حيث تؤمن الأكياس المولدة للغاز تحرر الأكسجين بنسبة تتراوح بين 5.5 - 12% بعد مرور 24 ساعة من الحضن. ثم يُحكم إغلاق الكيس، ويوضع في الحاضنة بالدرجة 37°C لمدة 7 أيام، حيث تظهر مستعمرات صغيرة شفافة عديمة اللون بقطر أقل من 2 ملم على الوسط الزرعي في حال وجود هذه الجراثيم (إيجابية الزرع). يجري التعرف على هذه الجراثيم بإجراء تلوين غرام، حيث تظهر تحت المجهر بشكل عصيات حلزونية الشكل حمراء اللون (سلبية الغرام). ويجري التأكد منها ببعض الاختبارات الكيميائية الحيوية المميزة لها، حيث تتميز بكونها إيجابية اليورياز- إيجابية الكاتالاز – إيجابية الأكسيداز (5).
الكشف عن مستضدات المَلْوِيَّة البَوَّابية في البراز
العتائد المستخدمة في العمل
1- عتيدة HP Ag stool extraction، إنتاج شركة DIA.PRO الإيطالية، لاستخلاص مستضدات المَلْوِيَّة البَوَّابية من البراز.
2- عتيدة HPSAg، من إنتاج شركة DIA.PRO الإيطالية، للكشف النوعي عن مستضدات الملتوية البوابية في البراز بواسطة المقايسة المناعية الإنزيمية.
مبدأ الطريقة: تعتمد هذه الطريقة على الكشف عن مستضدات المَلْوِيَّة البَوَّابية باستخدام صفيحة microplate تحتوي على آبار صغيرة مبطنة بأضداد وحيدة النسيلة للمَلْوِيَّة البَوَّابية (أضداد أولية)، حيث تضاف العينات المستخلصة من البراز ثم تضاف أضداد الضد للملتوية البوابية الموسومة ببيروكسيداز الفجل الحار HPR (أضداد ثانوية) وتُحضن، فترتبط المستضدات، في حال وجودها، مع الأضداد الأولية من طرف ومع الأضداد الثانوية من الطرف الآخر. ثم تُغسل الآبار للتخلص من العينات والأضداد الثانوية غير المرتبطة. تضاف بعد ذلك الرَكيزَة الإنزيمية وهي تترامثيل بنزيدين المقترنة مع الربيطة إلى الآبار وتحضن، ففي حال وجود معقد (ربيطة- ضد ثانوي– مستضد- ضد أولي) تتحلمه الرَكيزَة بواسطة إنزيم البيروكسيداز معطية لوناً تقاس كثافته الضوئية بوساطة مقياس الطيف الضوئي باستخدام قارىء microELISA لشركة Bio-Tek في موجة طولها 450 نانومتر.
|
| النتائج Results |
كانت النتائج كاملة وبشكل مفصل كما هو مذكور في الجداول 1-6.
جرت دراسة العلاقة بين الزرع الجرثومي وكشف مستضد المَلْوِيَّة البَوَّابية في البراز عن طريق التابع square-Chi، اعتمد في استخراج النتائج على البرنامج الحاسوبيversion 13) ) SPSS. واعتبرت قيمة p < 0.05)) معتداً بها إحصائياً.
المناقشة والاستنتاج
وجد بالدراسة الحالية أن هنالك 31 حالة تطابقت فيها نتائج كلا الاختبارين، أي أنه يوجد توافق بين نتائج الاختبارين بنسبة 62%، حيث كانت 11 عينة إيجابية بكلا الاختبارين و20 عينة سلبية بكلا الاختبارين. كما وجد أن هنالك 19 حالة اختلفت فيها نتائج الاختبارين، أي أنه يوجد اختلاف بين نتيجة الاختبارين بنسبة 38% حيث
كانت 6 عينات سلبية الزرع الجرثومي وإيجابية اختبار كشف المستضد في البراز و13 عينة إيجابية الزرع الجرثومي وسلبية اختبار كشف المستضد في البراز.
وجد في الدراسة الحالية أن عدد الحالات الإيجابية بتطبيق الزرع الجرثومي 24 حالة وعدد الحالات الإيجابية بتطبيق اختبار كشف المستضد في البراز 17 حالة، أي أن نسبة إيجابية الزرع الجرثومي أعلى من اختبار كشف المستضد في البراز. كما لم يلاحظ وجود ارتباط إحصائي هام بين الزرع الجرثومي واختبار كشف المستضد في البراز حيث كانت قيمة P= 0.09.
بالنسبة للمرضى الذين كانت لديهم نتائج الاختبارين السابقين سلبية، فإنه لا يمكن الجزم بنفي دور المَلْوِيَّة البَوَّابية في إحداث القرحة لديهم إلا إذا تم تطبيق اختبار فائق الحساسية كاختبار الـ PCR كاختبار مرجعي، لذلك نرى أنه يجب تطبيق كلا الاختبارين عند التحري عن دور المَلْوِيَّة البَوَّابية بالقرحة الهضمية وعدم الاكتفاء باختبار واحد.
|
الجدول 1: نتائج الزرع الجرثومي وكشف مستضد المَلْوِيَّة البَوَّابية في البراز للحالات المدروسة.
الزرع |
كشف المستضد في البراز |
رقم الحالة |
الزرع |
كشف المستضد
في البراز |
رقم الحالة |
ايجابي |
ايجابي |
26 |
ايجابي |
ايجابي |
1 |
ايجابي |
ايجابي |
27 |
ايجابي |
ايجابي |
2 |
سلبي |
ايجابي |
28 |
ايجابي |
سلبي |
3 |
سلبي |
ايجابي |
29 |
سلبي |
سلبي |
4 |
سلبي |
ايجابي |
30 |
سلبي |
سلبي |
5 |
سلبي |
سلبي |
31 |
ايجابي |
ايجابي |
6 |
سلبي |
ايجابي |
32 |
سلبي |
سلبي |
7 |
سلبي |
سلبي |
33 |
سلبي |
سلبي |
8 |
سلبي |
سلبي |
34 |
ايجابي |
ايجابي |
9 |
ايجابي |
سلبي |
35 |
سلبي |
سلبي |
10 |
سلبي |
سلبي |
36 |
سلبي |
سلبي |
11 |
ايجابي |
ايجابي |
37 |
ايجابي |
سلبي |
12 |
سلبي |
سلبي |
38 |
ايجابي |
ايجابي |
13 |
سلبي |
ايجابي |
39 |
سلبي |
سلبي |
14 |
سلبي |
سلبي |
40 |
سلبي |
ايجابي |
15 |
ايجابي |
سلبي |
41 |
سلبي |
سلبي |
16 |
سلبي |
ايجابي |
42 |
ايجابي |
ايجابي |
17 |
سلبي |
ايجابي |
43 |
سلبي |
سلبي |
18 |
سلبي |
ايجابي |
44 |
سلبي |
ايجابي |
19 |
ايجابي |
ايجابي |
45 |
ايجابي |
سلبي |
20 |
سلبي |
ايجابي |
46 |
سلبي |
ايجابي |
21 |
سلبي |
سلبي |
47 |
سلبي |
سلبي |
22 |
سلبي |
ايجابي |
48 |
سلبي |
سلبي |
23 |
سلبي |
سلبي |
49 |
سلبي |
ايجابي |
24 |
ايجابي |
ايجابي |
50 |
سلبي |
سلبي |
25 |
الجدول 2: عدد الحالات الإيجابية والسلبية للزرع لدى مرضى القرحة الهضمية.
العدد الكلي للحالات الإيجابية للزرع |
العدد الكلي للحالات السلبية
للزرع |
العدد الكلي للمرضى المدروسين |
24 |
26 |
50 |
الجدول 3: عدد الحالات الإيجابية والسلبية لاختبار كشف المستضد في البراز لدى مرضى القرحة الهضمية.
العدد الكلي للحالات الإيجابية لاختبار HPSAg |
العدد الكلي للحالات السلبية لاختبار HPSAg |
العدد الكلي للمرضى المدروسين |
17 |
33 |
50 |
الجدول 4: النسبة المئوية للحالات الإيجابية والسلبية للزرع.
نتائج |
عدد المرضى 50 = |
العدد % |
إيجابي |
24 |
48 |
سلبي |
26 |
52 |
الجدول 5: النسبة المئوية للحالات الإيجابية والسلبية لاختبار كشف المستضد في البراز.
نتائج |
عدد المرضى 50 = |
العدد % |
إيجابي |
17 |
34 |
سلبي |
33 |
66 |
الجدول 6: مقارنة بين اختبار كشف المستضد في البراز والزرع لدى المرضى جميعهم.
|
كشف المستضد في البراز إيجابي |
كشف المستضد في البراز سلبي |
المجموع |
الزرع إيجابي |
11 |
13 |
24 |
الزرع سلبي |
6 |
20 |
26 |
المجموع |
17 |
33 |
50 |
|
| المراجع References |
1-Marshall B.J. and Warren JR.
Unidentified curved bacilli in the stomach of patients with gastritis and peptic ulceration.
Lancet, 1(8390): 1311-1315, 1984.
2-Mattar R; Marques SB; Monterio MS; Dos Santos AF; Iriya K. and Carrilho FJ.
Helicobacter pylori cag pathogenicity island genes: clinical relevance for peptic ulcer disease development in Brazil.
J Med Microbiol, 56(Pt 1): 9-14, 2007.
3-Angela C. and Charles W.
Helicobacter pylori.
Molecular Medical Microbiology, 1331-1354, 2001.
4-Johannes G; Arnoud H.M. and Ernst J.
Pathogenesis of Helicobacter pylori Infection.
Clin Microbial, 19(3): 449-490, 2006.
5-Murray.
Vibrio and related genera.
Practical Medical Microbiology, 439-443, 2000.
|
| |
| |
