بحث في أعداد المجلة الجملة   المؤلف

المجلد 6 , العدد 7 , ذو القعدة 1433 - تشرين أول (أكتوبر) 2012   تواتر ألائل HLA-DRB1 لدى مرضى سوريين مصابين بالتهاب المفاصل الروماتويدي Frequency of HLA-DRB1 Alleles in Syrian Rheumatoid Arthritis Patients د. جميل مراد و أ. د. فوزة منعم Mourad J. and Monem F. كلية الصيدلة، جامعة دمشق Faculty of Pharmacy, Damascus University. الملخص Abstract على الرغم من انتشار التهاب المفاصل الروماتويدي بشكل واسع في مناطق سورية مختلفة، فإنه لا توجد دراسات حول دور ألائل مستضد الكريات البيضاء HLA. لذلك هدفت دراستنا إلى تعيين ترابط ألائل HLA-DRB1 مع الاستعداد للإصابة بالتهاب المفاصل الروماتويدي ووخامته في سورية. هذه دراسة حالة-شاهد case-control study لمرضى التهاب المفاصل الروماتويدي الذين راجعوا مستشفيات حكومية وجامعية في مدينة دمشق في الفترة ما بين 02/01/2010 و30/08/2011. أجري التنميط الجيني لـستة وثمانين مريضاً ولمئتين من الشواهد الأصحاء بطريقة تفاعل البوليميراز التسلسلي مع مَشْرَع محدد التتالي (PCR-SSP). أظهرت تواترات كل من HLA-DRB1 *01، و*04، و*10 ارتباطاً قوياً مع الاستعداد للإصابة بالمرض [(OR=2.29) (95%CI: 1.11-4.75) (P=0.022)؛ (OR=3.16) (95%CI: 2.08-4.8) (P<0.0001)؛ (OR=2.43) (95%CI: 1.07-5.51) (P=0.029)، على الترتيب]، بينما كانت تواترات الأليلين HLA-DRB1 *11 و*13 أقل، بشكل يُعتد به، لدى مرضى RA منها لدى الشواهد [(OR=0.49) (95%CI: 0.3-0.8) (P=0.004)؛ (OR=0.32) (95%CI: 0.15-0.69) (P=0.002)، على الترتيب]. ولم تُظهر ألائل HLA-DRB1 الأخرى أي فرق يُعتد به. بَيَّنَت نتائجنا أن الألائل HLA-DRB1 *01، و*04، و*10 ترتبط بالإصابة بالتهاب المفاصل الروماتويدي؛ في حين أن الألائل HLA-DRB1 *11 و*13 تكون محصنة ضد RA في مجتمعنا.   Although rheumatoid arthritis (RA) is widely distributed in different Syrian areas, studies of human leukocyte antigen (HLA) alleles’ role are absent. Hence, the aim of our study was to determine the association of HLA-DRB1 alleles with the susceptibility and severity of rheumatoid arthritis in Syria. This is a Case control study of rheumatoid arthritis patients referred to public and university hospitals in Damascus between 02/01/2010 and 30/08/2011. Eighty six RA patients and two hundred healthy controls from Syria were genotyped using polymerase chain reaction with sequence-specific primer (PCR-SSP). The HLA-DRB1*01, *04, and *10 frequencies showed a strong association with the disease susceptibility [(OR=2.29) (95%CI=1.11–4.75) (P=0.022); (OR=3.16) (95%CI=2.08–4.8) (P<0.0001); (OR=2.43) (95% CI=1.07–5.51) (P=0.029) respectively], while the frequencies of HLA-DRB1*11, and *13 were significantly lower in RA patients than the controls [(OR=0.49) (95% CI=0.3–0.8) (P=0.004); (OR=0.32) (95% CI=0.15–0.69) (P=0.002) respectively]. The other HLA-DRB1 alleles showed no significant difference. Our results indicate that HLA-DRB1*01, *04, and *10 alleles are related with RA, while HLA-DRB1*11 and *13 are protective against RA in our population.   المقدمة Introduction  يُعَدُّ التهاب المفاصل الروماتويدي rheumatoid arthritis (RA) واحداً من الأمراض المناعية المعقدة مجهول السبب. يقدر انتشاره بـ 0.5% إلى 1% بين سكان العالم (11). يتصف بالتهاب مزمن، والتهاب الزليل، وألم، وتخريب مترقٍّ في الغضروف والعظام مؤدياً إلى عجزٍ وظيفي (13). يصيب هذا الداء النساء بمعدل اثنتين إلى ثلاث مقابل كل رجل. يعد سنّ الأربعينات من العمر الذروة العمرية للإصابة بالمرض، لكن يمكن أن يحدث في أي عمر (16). تلعب العوامل الجينية والبيئية أدواراً أساسيةً في الآلية الإمراضية. تقدر القدرة التوارثية Heritability للـ RA بحوالي 60% (9). يشكل الهلا HLA 30% من عوامل الاختطار المورثية، مما يجعله أهم هذه العوامل (6، 11). تَصف نظرية الحاتمات المشتركة shared epitopes (SE) العلاقة بين HLA-DRB1 والتهاب المفاصل الروماتويدي (8). ترتبط ألائل HLA-DRB1 المُرَمِّزَة للحاتمات المشتركة (DRB1 *01، *04، *10، و*14) بالوخامة البنيوية structural severity للـ RA (3، 6). من جهةٍ أخرى، تؤهب بعض الأنماط الجينية سلبية الـ SE (DRB1 *11 و*13) للتحصين والحماية ضد التهاب المفاصل الروماتويدي (3). لا توجد علاقة ثابتة بين ألائل الهلا والتهاب المفاصل الروماتويدي لدى البشر جميعهم، أو في مختلف المناطق الجغرافية، أو عند المجموعات العرقية المتنوعة (11). ونظراً لانتشار التهاب المفاصل الروماتويدي في المحافظات السورية جميعها، ولعدم وجود دراسات حول الدور المؤهب لألائل الهلا HLA، هدفت دراستنا إلى تعيين ارتباط HLA-DRB1 بالاستعداد للإصابة بالتهاب المفاصل الروماتويدي في جمهرةٍ سورية.   المواد والطرق Materials and Methods  صمم البحث كدراسة استباقية prospective study بشكل حالة-شاهد case-control. جُمعت عينات دم وريدية (2 مل) من 86 مريضاً (متوسط الأعمار 41.41±10.57 عاماً، 69 امرأة، 17 رجلاً) راجعوا العيادات المفصلية في مستشفى ابن النفيس، ومستشفى الأسد الجامعي، ومستشفى المواساة الجامعي، بين كانون الثاني 2010 وآب 2011. استوفى المرضى جميعهم معايير الكلية الأمريكية لطب الروماتيزم ACR (2). اختير 200 متطوع من الشواهد الأصحاء (متوسط الاعمار 40.21±10.11 عاماً، 160 امرأة، 40 رجلاً) متطابقين عمرياً وجنسياً كمجموعات شاهدة. استُحْصِلَ على موافقة مستنيرة من المرضى والشواهد الأصحاء جميعهم. اسْتُخْلِصَ دنا DNA المرضى والشواهد الأصحاء من 300 µL دم وريدي كامل (على أنبوب EDTA) باستخدام عتيدةHigh Pure PCR Template Preparation Kit (Roche، Mannheim، Germany). أجري التنميط الجيني لألائل HLA-DRB1 بطريقة تفاعل البوليميراز التسلسلي مع مَشْرَع محدد التتالي polymerase chain reaction with sequence-specific primers باستخدام عتيدة Micro SSP™ Generic HLA Class II (DRB) (One Lambda Inc.، CA، USA). حُسِبَ Odds Ratio (OR) ومعامل الثقة 95% confidence interval (95%CI) لتقييم قوة الارتباطات. استعمل كاي مربع Chi-squared في الدلالات الإحصائية واعتبر الفارق عند P<0.05 معتداً به احصائياً.   النتائج Results  يلخص الجدول 1 المعلومات السكانية لكل من مرضى الـ RA (86n=) وأفراد المجموعة الشاهدة (200n=)، حيث كانت الأعمار والأجناس متقاربة بين المجموعتين. أظهرت نتائج توزع تواتر ألائل HLA-DRB1 عنـد مرضى التهاب المفاصـل الروماتويـدي والشواهد الأصحاء (الجدول 2) لكل من HLA-DRB1 *01، و*04، و*10 تواتراً مرتفعاً عند المرضى [(OR=2.29) (95%CI: 1.11-4.75) (P=0.022)؛ (OR=3.16) (95%CI: 2.08-4.8) (P<0.0001)؛ (OR=2.43) (95%CI: 0.7-5.51) (P=0.029) على الترتيب]. كما تبين أن HLA-DRB1 *11 و*13 أكثر تواتراً عند الشواهد الأصحاء، منها عند المرضى [(OR=0.49) (95%CI: 0.3-0.8) (P=0.004)؛ (OR=0.32) (95%CI: 0.15-0.69) (P=0.002) على الترتيب]. لم تظهر ألائل HLA-DRB1 الأخرى أية دلالة إحصائية (تواتر أليل DRB1 *16 لم يعتد به إحصائياً لأن الرقم واحد جاء بين حدّي الـ 95%CI رغم أن P<0.05). أظهر تواتر ألائل الحاتمات المشتركة SE (مجموع تواتر DRB1 *01، و*04، و*10، و*14) ارتفاعاً عند المرضى [(OR=3.41) (95%CI: 2.34-4.95) (P<0.0001)] بالمقارنة مع الشواهد الأصحاء.   المناقشة Discussion  تناولت دراسات عدة الانتشار الجغرافي الحيوي لألائل الهلا المرتبطة بالتهاب المفاصل الروماتويدي لدى عدة إثنيات وأعراق حول العالم (3، 11). أشارت العديد من التقارير حول العالم إلى وجود ارتباط بين HLA-DRB1 *04 والتهاب المفاصل الروماتويدي (1، 4، 7، 10، 12، 17). بالإضافة إلى ذلك ارتبط تأهُّب الإصابة بالـ RA مع عدد من ألائل الهلا الأخرى مثل DRB1 *01 في تركيا (17)، وإيطاليا (4)، والبرازيل (12)؛ DRB1 *08 في السعودية (1)؛ DRB1 *09 في شرق آسيا (10)، وتركيا (17)؛ DRB1 *10 في السعودية (1)، وشرق آسيا (10)، وإيران (15)، والبرازيل (12)؛ DRB1 *14 في البيرو (5) (الجدول 3). أظهرت نتائجنا أن استعداد الإصابة بالـ RA مترابط مع DRB1 *01، و*04، و*10، مما يتوافق مع نتائج الدول القريبة. على الرغم من   عدم وجود دلالة إحصائية (P>0.05)، أظهرت ألائل DRB1 *09، و*14، و*16 تواتراً أعلى عند المرضى مقارنةً بالشواهد الأصحاء. ذُكِرَ الدور المحصِّن من الإصابة بالـ RA لبعض ألائل الهلا المدروسة لدى مجموعات مختلفة في عدة مراجعات نظرية (6، 14). حيث كان للـ DRB1 *03 دوراً محصناً في إيران (15)؛ *06 في السعودية (1)؛ *07 في تونس (7)؛ *11 في البيرو (5)؛ و*13 في تركيا (17) وشرق آسيا (10) (الجدول 3). ارتبطت الـ DRB1 *11 و *13 في هذه الدراسة ارتباطاً عكسياً مع الإصابة بالـ RA منبئةً بدورٍ محصّنٍ في مجتمعنا. على الرغم من افتقار دراستنا للتنميط الجيني رباعي العدد (أربعة أرقام بعد HLA-DRB1)، أظهرت نتائجنا علاقة حازمة (resolute relationship) بين الحاتمات المشتركة (مجموع DRB1 *01، و*04، و*10، و*14) والتهاب المفاصل الروماتويدي [(OR=3.41) (95%CI: 2.34-4.95) (P<0.0001)]. الاستنتاجات Conclusions  حُدِّدَت الألائل HLA-DRB1 *01، و*04، و*10 كمؤهبة للإصابة بالتهاب المفاصل الروماتويدي وHLA-DRB1 *11 و*13 كمحصنة في المجتمع السوري.    المراجع References  1-Al-Swailem R, Al-Rayes H, Sobki S, Arfin M. and Tariq M. HLA-DRB1 association in Saudi rheumatoid arthritis patients. Rheumatol Int; 2006; 26: 1019-1024. 2-Arnett FC, Edworthy SM, Bloch DA, McShane DJ, Fries JF, Cooper NS, Healey LA, Kaplan SR, Liang MH. and Luthra HS. The American Rheumatism Association 1987 revised criteria for the classification of rheumatoid arthritis. Arthritis Rheum; 1988; 31: 315-324. 3-Bax M, van Heemst J, Huizinga TW. and Toes RE. Genetics of rheumatoid arthritis: what have we learned? Immunogenetics; 2011; 63: 459-466. 4-Bongi SM, Porfirio B, Rombola G, Palasciano A, Beneforti E. and Bianucci G. Shared-epitope HLA-DRB1 alleles and sex ratio in Italian patients with rheumatoid arthritis. Joint Bone Spine; 2004; 71: 24-28. 5-Castro F, Acevedo E, Ciusani E, Angulo JA, Wollheim FA. and Sandberg-Wollheim M. Tumour necrosis factor microsatellites and HLA-DRB1*, HLA-DQA1*, and HLA-DQB1* alleles in Peruvian patients with rheumatoid arthritis. Ann Rheum Dis; 2001; 60: 791-795. 6-de Vries R. Genetics of rheumatoid arthritis: time for a change! Curr Opin Rheumatol; 2011; 23: 227-232. 7-Dhaouadi T, Sfar I, Abdelmoula L, Bardi R, Jendoubi-Ayed S, Makhlouf M, Aouadi H, Ben Abdallah T, Zouari R, Ayed K. and Lakhoua-Gorgi Y. Association of specific amino acid sequence (QRRAA) of HLA-DRB1*0405 with rheumatoid arthritis in a Tunisian population. Arch Inst Pasteur Tunis; 2010; 87: 53-59. 8-Gregersen PK, Silver J. and Winchester RJ. The shared epitope hypothesis. An approach to understanding the molecular genetics of susceptibility to rheumatoid arthritis. Arthritis Rheum; 1987; 30: 1205-1213. 9-Hoovestol RA. and Mikuls TR. Environmental Exposures and Rheumatoid Arthritis Risk. Curr Rheumatol Rep; 2011: 1-9. 10-Jun KR, Choi S-E, Cha C-H, Oh H-B, Heo Y-S, Ahn H-Y. and Lee K-J. Meta-analysis of the Association between HLA-DRB1 Allele and Rheumatoid Arthritis Susceptibility in Asian Populations. J Korean Med Sci; 2007; 22: 973. 11-Kochi Y, Suzuki A, Yamada R, Yamamoto K. Genetics of rheumatoid arthritis: underlying evidence of ethnic differences. J Autoimmun; 2009; 32: 158-162. 12-Louzada-J?nior P, Freitas MVC, Oliveira RDR, Deghaide NHS, Conde RA, Bertolo MB, Donadi EA. A majority of Brazilian patients with rheumatoid arthritis HLA-DRB1 alleles carry both the HLA-DRB1 shared epitope and anti-citrunillated peptide antibodies. Braz J Med Biol Res; 2008; 41: 493-499. 13-Neumann E, Lefevre S, Zimmermann B, Gay S, Muller-Ladner U. Rheumatoid arthritis progression mediated by activated synovial fibroblasts. Trends Mol Med; 2010; 16: 458-468. 14-Newton JL, Harney SM, Wordsworth BP, Brown MA. A review of the MHC genetics of rheumatoid arthritis. Genes Immun; 2004; 5: 151-157. 15-Sandoughi M, Fazaeli A, Bardestani G, Hashemi M. Frequency of HLA-DRB1 alleles in rheumatoid arthritis patients in Zahedan, southeast Iran. Ann Saudi Med; 2011; 31: 171-173. 16-Suchomel P, Buchvald P, Choutka O. Rheumatoid Arthritis. In, Suchomel P, Choutka O (ed). Reconstruction of Upper Cervical Spine and Craniovertebral Junction. Berlin Heidelberg; Springer; 2011; 235-246. 17-Ucar F, Karkucak M, Alemdaroglu E, Capkin E, Yucel B, Sonmez M, Tosun M. and Karaca A. HLA-DRB1 allele distribution and its relation to rheumatoid arthritis in eastern Black Sea Turkish population. Rheumatol Int; 2011.     المجلد 6 , العدد 7 , ذو القعدة 1433 - تشرين أول (أكتوبر) 2012 SCLA