تشرين أول (أكتوبر) 2013-SCLA - مجلة التشخيص المخبري

المجلد 7 , العدد 1 , ذو القعدة 1434 - تشرين أول (أكتوبر) 2013

تعيين مستويات HDL و CETPلدى مرضى سكريين بدينين سوريين

Serum HDL and CETP Levels in Syrian Obese Diabetic Patients

د. سميه سيد رمضان، أ. د. جمال تشفيك، أ. د. فايزة القبيلي

Sayed Ramadan S., Cevik G. and Al Quobaili F.

كلية الصيدلة، جامعة دمشق، سورية. كلية الطب، جامعة غازي، أنقرة، تركيا.
Faculty of pharmacy, Damascus University, Syria.
Faculty of Medicine, Gazi University, Ankara, Turkey.

الملخص Abstract

يتكون بروتين CETP من 476 حمضاً أمينياً (74 كيلودالتون)، مع أربعة مواقع لارتباط الغليكوزيل بالنتروجين. وهذا الجزيء مسؤول عن فعالية نقل إستر الكوليستيريل وثلاثيات الغليسريد في البلازما.
هدفنا إلى دراسة أثر السكري نمط 2 على فعالية البروتين الناقل لإستر الكوليستيريل ((CETP. وإلى تقييم العلاقة بين مستويات CETP وكلٍ من: الكوليستيرول الكلي TC، ثلاثيات الغليسريد TG، البروتينات الشحمية المرتفعة الكثافة HDL، البروتينات الشحمية المنخفضة الكثافة LDL.
بُزل الدم في الصباح بعد صيام ليلة كاملة لـ 146 شخصاً (70 بديناً يعاني من السكري، و76 فرداً بديناً كمجموعة شاهدة). قيست فعالية CETP في المصل باستخدام المقايسة بالتألق Fluorescence، في حين قيست تراكيز كلٍ من الـ Chol, TG, HDL, LDL Glu, باستخدام المقايسة الإنزيمية اللونية.
لم يكن هنالك فارق يعتد به إحصائياً في مستويات CETP بين السكريين البدينين والبدينين 60.38)، 58.15 بيكومول/ مكل/1 ساعة، على الترتيب؛ (P = 0.28. كما تبين وجود علاقة ارتباط طردية يعتد بها بين فعالية CETP وكلٍ من BMI وChol وTG وLDL (P= 0.03، P< 0.0001، P=0.001، P= 0.04، على الترتيب)، بينما ارتبطت هذه الفعالية عكسياً مع HDL-c (P< 0.0001) لدى مجموعة المرضى السكريين البدينين.
أظهرت هذه الدراسة علاقة ارتباط يُعتد بها بين مستويات CETP المصلية والكوليستيرول وHDL-c لدى مجموعتي البدينين والسكريين البدينين. وهذا يقترح دوراً محتملاً للـ CETP في شذوذ شحميات الدم الملاحظ لدى السكريين وخاصة البدينين منهم.

CETP is a 476 amino acid protein (74 kDa) with four N-linked glycosylation sites. This molecule is responsible for all cholesteryl ester (CE) and triglyceride (TG) transfer activity in plasma.
We aimed to study the effect of Diabetes Mellitus type 2 on CETP activity and to evaluate the relationship of CETP levels with total chol (TC), TG, HDL and LDL.
Blood was drawn in the morning after an overnight fast from 146 subjects (70 Diabetic obese patients, 76 obese subjects as control group). CETP activity were measured in Serum using Fluorescence assay, whereas Chol, TG, HDL and Glu. were measured using Enzymatic colorimetric assay.
There was no significant difference between CETP levels in diabetic obese patients and obese subjects (60.38, 58.15 pmol/µl/1hr, respectively; P=0.28). There was considering direct relation for CETP activity with BMI, Chol, TG and LDL (P=0.03, P<0.0001, P= 0.001, P=0.04, respectively), while this activity correlated negatively with HDL-c (P< 0.0001) in Diabetic obese patients group.
This study showed a considering relation of serum CETP levels with Chol and HDL-c in diabetic patients and obese groups. This suggests that CETP may affect the dyslipidemia noted in type 2 diabetes particularly obese one.

المقدمة Introduction

يتميز النمط الشحمي عند مرضى السكري النمط 2 بازدياد جسيمات البروتينات الشحمية الغنية بثلاثيات الغليسريد TG وجسيمات البروتينات الشحمية صغيرة الكثافة small dense LDL مع انخفاض مستويات الجسيمات الشحمية مرتفعة الكثافة HDL-c (1، 2). ولقد بينت العديد من الدراسات الوبائية خلال العقود الماضية أن HDL-c يرتبط عكساً مع حدوث مرض القلب التاجي (CHD) coronary heart disease (3)، حيث أن زيادة HDL-c بمقدار1 mg/dl تترافق بنقصان اختطار الموت بالـ CHD بمعدل 2-3% بشكل مستقل عن مستويات LDL-c (4). لذا فمن الأهمية فهم أسباب شُذُوْذَاتُ اسْتِقْلاَبِ الشَّحْمِيَّات لدى مرضى السكري، لإيجاد طرق فعالة لتحسين استقلاب الشحميات وخفض اختطار الإصابة بالـ .CHD
إن CETP عبارة عن بروتين يتكون من 476 حمضاً أمينياً، ويزن 74 kDa، كما يحوي أربعة مواقع لارتباط الغليكوزيل بالنتروجين وهي: N88, N240, N341 and N396 (5). وهو يحفز إعادة توزيع إستر الكوليستريل وثلاثيات الغليسريد والشحوم الفسفورية بين البروتينات الشحمية البلازمية. ينقل CETP الشحوم من أحد البروتينات الشحمية إلى آخر، في عملية تؤدي إلى توازن الشحوم بين أجزاء البروتينات الشحمية. إن التأثير الإجمالي للـ CETP هو نقل إستر الكوليستريل (CE) من HDLs إلى البروتينات الشحمية الغنية بثلاثيات الغليسريد TRLs وLDLs ونقل TG من TRLs إلى LDLs وHDLs. وبالتالي إن النقل المتواسط بإنزيم CETP من HDL إلى VLDL وLDL يؤمن طريقاً فعالاً غير مباشر يجري من خلاله تسليم إسترات كوليستيريل الـ HDL إلى الكبد (6). وعندما تزداد مستويات VLDLs ، كما يحدث لدى المرضى المصابين بالسكري النمط 2، فإن نقل إسترات الكوليستيريل من HDL المتواسط بالـ CETP يجري بشكل تفضيلي إلى جسيمات VLDL الأكبر وبذلك تصبح أغنى بالكوليستيرول وتملك فعالية معصدة أكثر (1). ولقد بينت العديد من الدراسات أن عوز CETP يترافق مع ارتفاع في مستويات HDL (8-6).
تعد زيادة مستويات HDL-c استراتيجية واعدة للتخفيض من اختطار CHD . ويوجد حالياً القليل من البدائل العلاجية لزيادة مستويات HDL-c، منها الستاتينات والفيبرات والنياسين (9، 10). لذلك يوجد اهتمام أكبر لتطوير علاجات جديدة تؤدي إلى زيادة مستويات HDL-c الجائلة لمعالجة الأمراض القلبية الوعائية. ويعد تثبيط CETP هدفاً واعداً لزيادة تراكيز HDL-c الجائلة عند البشر وإنقاص ترقي التصلب العصيدي.

المواد والطرق Materials and Methods

الاعتيان Sampling
جرى الحصول على عينات الدراسة في الفترة ما بين 6/7/2011 و25/1/2012 ، من مراجعي مركز العيادات الشاملة التابع لوزارة الصحة، بينما جرى الحصول على معظم عينات المجموعة الشاهدة من متطوعين لا يراجعون أي مركز طبي. أُخِذت عينات الدم (5 مل دم وريدي على أنبوب جاف) على الريق، بعد صيام ليلة كاملة، في الفترة ما بين الساعة الثامنة ليلاً والعاشرة صباحاً، ونُبِذَت، خلال مدة لا تتجاوز ساعة بعد بزل الدم، بسرعة 5000 دورة في الدقيقة لمدة 5 دقائق، ووُزِع المصل الناتج على أربعة أنابيب إيبندورف، حُفِظت العينات عند الدرجة °80-م إلى وقت إجراء المقايسات. جرت بعد ذلك مقايسة CETP بمقياس التألق باستخدام عتيدة CETP Activity Assay Kit لشركة DRG ، ألمانيا. وتسمح هذه العتيدة بحساب فعالية CETP البشري في المصل والبلازما، بينما قيس الـ Glu والـ Chol. total وTG وHDL بالطريقة الإنزيمية اللونية باستخدام عتائد تجارية من شركة Roche، ألمانيا. ويبين الجدول 1 الخصائص السريرية لمجموعات الدراسة. جرى التعبير عن النتائج باستخدام المتوسط الحسابي والانحراف المعياري لكل مجموعة واعتمد اختبار T Student لتحديد ما إذا كان الفارق بين المتوسطات حقيقياً أم ناجماً عن الصدفة. كما اعتمد معامل ارتباط Pearson لدراسة علاقة الارتباط بين متثابتات المجموعة الواحدة.

النتائجResults

بلغت قيمتا المتوسط الحسابي ± الانحراف المعياري لفعالية CETP 12.59 ± 60.38 بيكومول/ مكل/ ساعة لدى مرضى السكري البدينين، بينما كانتا 58.15±12.24 بيكومول/ مكل/ ساعة لدى مجموعة الأفراد البدينين (الشكل 1). وعند تطبيق اختبار T Student لم يلاحظ فارق يعتد به إحصائياً (P=0.28) بين متوسط مستويات CETP لدى هاتين المجموعتين.

تعيين ومقارنة قيم الغلوكوز لدى مجموعات الدراسة
بلغت قيمتا المتوسط الحسابي ± الانحراف المعياري لتراكيز الغلوكوز 194.54± 78.48 ملغ/ دل لدى مرضى السكري البدينين. بينما كانت هاتان القيمتان 97.18±9.84 ملغ/ دل لدى مجموعة البدينين (الشكل (2.
عند تطبيق اختبار T Student لوحظ فارق يعتد به إحصائياً (P<0.0001) بين متوسط مستويات الغلوكوز لدى هاتين المجموعتين.
تعيين ومقارنة قيم ثلاثيات الغليسريد لدى مجموعات الدراسة
بلغت قيمتا المتوسط الحسابي ± الانحراف المعياري لتراكيز ثلاثيات الغليسريد 228.45 ± 156.2 ملغ/ دل لدى مرضى الداء السكري البدينين. بينما كانت هاتان القيمتان 154.63 ± 96.58 ملغ/ دل لدى مجموعة البدينين (الشكل (3.
وعند تطبيق اختبار T Student لوحظ فارق يعتد به إحصائياً (P=0.001) بين متوسط مستويات ثلاثيات الغليسريد لدى هاتين المجموعتين.
تعيين ومقارنة قيم الكوليستيرول لدى مجموعات الدراسة
بلغت قيمتا المتوسط الحسابي ± الانحراف المعياري لتراكيز الكوليستيرول 206.28 ± 44.18 ملغ/ دل لدى مرضى السكري البدينين. بينما كانت هاتان القيمتان 192.92 ± 35.46 ملغ/ دل لدى مجموعة البدينين (الشكل (4.
وعند تطبيق اختبار T Student لوحظ فارق يعتد به إحصائياً (P=0.048) بين متوسط مستويات الكوليستيرول لدى هاتين المجموعتين.

تعيين ومقارنة قيم HDL لدى مجموعات الدراسة
بلغت قيمتا المتوسط الحسابي ± الانحراف المعياري لتراكيز HDL 37.01 ± 10.62 ملغ/ دل لدى مرضى السكري البدينين. بينما كانت هاتان القيمتان 42.03±12.75 ملغ/ دل لدى مجموعة البدينين (الشكل (5.
وعند تطبيق اختبار T Student لوحظ فارق يعتد به إحصائياً (P=0.01) بين متوسط مستويات HDL لدى مجموعة البدينين ومتوسط مستويات HDL لدى مجموع مرضى السكري البدينين.
تعيين ومقارنة قيم LDL لدى مجموعات الدراسة
بلغت قيمتا المتوسط الحسابي ± الانحراف المعياري لتراكيز LDL 117.95 ± 31.93 ملغ/ دل لدى مرضى السكري البدينين. بينما كانت هاتان القيمتان 118.32±27.93 ملغ/ دل لدى مجموعة البدينين (الشكل (6.
وعند تطبيق اختبار T-Student لم يلاحظ وجود فارق يعتد به إحصائياً (P=0.91) بين متوسط مستويات LDL لدى مجموعة البدينين ومتوسط مستويات LDL لدى مجموعة مرضى الداء السكري البدينين.
دراسة العلاقة بين مستويات CETP ومنسب كتلة الجسم لدى مرضى السكري من النمط 2 البدينين
بدراسة العلاقة بين مستويات CETP ومنسب كتلة الجسم لدى مرضى السكري لوحظ وجود علاقة ارتباط طردية يعتد بها إحصائياً (R = 0.252; P=0.03) (الشكل 7).

دراسة العلاقة بين مستويات CETP والغلوكوز لدى مرضى السكري من النمط 2 البدينين
بدراسة العلاقة بين مستويات CETP والغلوكوز لدى مرضى السكري لم تكن هنالك علاقة ارتباط يعتد بها إحصائياً (R = 0.01; P=0.8) (الشكل 8).

دراسة العلاقة بين مستويات CETP وثلاثيات الغليسريد لدى مرضى السكري من النمط 2 البدينين
بدراسة العلاقة بين مستويات CETP وثلاثيات الغليسريد لدى مرضى السكري البدينين لوحظ وجود علاقة ارتباط طردية يعتد بها إحصائياً (R = 0.38; P=0.001) (الشكل 9).
دراسة العلاقة بين مستويات CETP والكوليستيرول لدى مرضى السكري من النمط 2 البدينين بدراسة العلاقة بين مستويات CETP والكوليستيرول لدى مرضى السكري لوحظ وجود علاقة ارتباط طردية يعتد بها إحصائياً (R = 0.52; P<0.0001) (الشكل 10).

دراسة العلاقة بين مستويات CETP و HDL لدى مرضى السكري من النمط 2 البدينين
بدراسة العلاقة بين مستويات CETP وHDL لدى مرضى السكري لوحظ وجود علاقة ارتباط عكسية يعتد بها إحصائياً (R = - 0.52; P<0.0001) (الشكل 11).

دراسة العلاقة بين مستويات CETP وLDL لدى مرضى السكري من النمط 2 البدينين
بدراسة العلاقة بين مستويات CETP وLDL لدى مرضى السكري لوحظ وجود علاقة ارتباط طردية يعتد بها إحصائياً (R = 0.23; P=0.04) (الشكل 12).

الجدول :1 الخصائص السريرية لمجموعات الدراسة.

الخصائص السريرية	مجموعة البدينين السكريين	مجموعة البدينين
المتوسط الحسابي للعمر مقدراً بالعام ± الانحراف المعياري	10.18 ± 53.69	10.76 ± 40.39
الذكور (النسبة المئوية)	(41.42%) 29	26 (34.21%)
الإناث (النسبة المئوية)	(58.57%) 41	50 (65.79%)
المتوسط الحسابي للـ BMI (كغ/ م2) ± الانحراف المعياري	4.4 ± 35.42	3.9 ± 34.64

المناقشة Discussion

لم نجد في دراستنا أي تأثير للسكري على فعالية CETP البلازمية، فكانت الفعالية متماثلة تقريباً لدى الأشخاص البدينين سواءً كانوا سكريين أم طبيعيين. ولقد توافقت نتائجنا هذه مع نتائج دراسة Elchebly M. وزملائه عام 1996 (11). بينما تعارضت مع دراسة MacLean P. وزملائه عام 2005 (12)، حيث وجدوا أن السكري من النمط الثاني يكبت التعبير عن CETP الكبدي لدى الأشخاص البدينين. وقد يعود ذلك إلى اختلاف متوسط BMI عند الأفراد بين الدراستين، فقد بلغ متوسط BMI عند السكريين المشمولين بدراسة MacLean P قيمة 52 كغ/ م 2 بينما بلغ متوسط BMI عند السكريين المشمولين في دراستنا 35.42 كغ/ م2.
لوحظت علاقة ارتباط طردية يعتد بها إحصائياً بين CETP وBMI لدى مجموعة المرضى البدينينR = 0.252; P<0.03) )، مما يعني أن البدانة تترافق مع ازدياد مستويات CETP. وبالتالي تعد البدانة أحد عوامل الاختطار المؤهبة لتطور الداء السكري النمط الثاني، وأحد أسباب اضطراب شحميات الدم.
كما ترافقت المستويات المرتفعة من CETP لدى مجموعة المرضى البدينين مع انخفاض في قيم HDL (علاقة ارتباط عكسية يعتد بها إحصائياً) وارتفاع في قيم TG (علاقة ارتباط طردية يعتد بها إحصائياً)، مما قد يشير إلى دور CETP في إحداث خلل في النمط الشحمي لدى هؤلاء المرضى. ومن المعروف أن مرضى الداء السكري النمط 2 يتميزون بازدياد جسيمات البروتينات الشحمية الغنية بالـ TG وانخفاض مستويات HDL-c (13). وتوافقت نتائجنا مع نتائج دراسة Arai T وزملائه عام 1994، حيث وجدوا علاقة ارتباط عكسية يعتد بها إحصائياً بين CETP وHDL لدى البدينين (14). كما توافقت مع نتائج دراسة MacLean P وزملائه عام 2000، حيث وجدوا اضطراباً في مستويات البروتينات الشحمية عند الأشخاص البدينين خاصة السكريين (15).
لوحظ أيضاً وجود علاقة ارتباط طردية يعتد بها إحصائياً بين مستويات CETP والكوليستيرول لدى المرضى البدينين (R =0.52; P<0.0001)، مما قد يشير إلى دور CETP في تراكم الكوليستيرول في الأوعية الدموية وبالتالي ازدياد اختطار حدوث الاختلاطات في الأوعية الدقيقة والكبيرة لديهم. ولقد توافقت نتائجنا هذه مع نتائج دراسة de Grooth G وزملائه عام 2004، حيث وجدوا أن CETP البلازمي يزداد عند الأشخاص الذين يعانون من فرط كوليستيرول الدم (16). الاستنتاج Conclusion أظهرت هذه الدراسة فعالية CETP المرتفعة لدى الأشخاص البدينين الأصحاء والسكريين. والتي ترافقت مع ارتفاع مستويات الكوليستيرول و TG وانخفاض مستويات HDL، مما يقترح دوراً محتملاً للـ CETP في حدوث اضطراب استقلاب الشحوم الملاحظ عند السكريين وخاصة البدينين.

المراجع References

1-Guerin M; Le Goff W; Lassel T; Van Tol A; Steiner G. and Chapman M.
Proatherogenic role of elevated cholesteryl ester transfer from HDL to VLDL1 and dense LDL in type 2 diabetes: impact of the degree of triglyceridemia.
Arterioscler Thromb Vasc Biol; 21: 282-288, 2001.

2-van Venrooij F. et al.
Common cholesteryl ester transfer protein gene polymorphisms and the effect of atorvastatin therapy in type 2 diabetes.
Diabetes Care, 26(4): 1216-1223, 2003.

3-Luc G. et al.
Value of HDL cholesterol, apolipoprotein A-I, lipoprotein A-I, and lipoprotein A-I/A-II in prediction of coronary heart disease: The PRIME Study.
Arterioscler Thromb Vasc Biol; 22: 1155-1161, 2002.

4-Boden W.
High-density lipoprotein cholesterol as an independent risk factor in cardiovascular disease: assessing the data from Framingham to the Veterans Affairs High Density Lipoprotein Intervention Trial.
Am. J. Cardiol; 86: 19L-22L, 2000.

5-Masson D; Cheng Jiang X; Lagrost L. and Tall A.
The role of plasma lipid transfer proteins in lipoprotein metabolism and atherogenesis.
J. Lipid Res; 50: S201-S206, 2009.

6-Barter P; Brewer Jr H; Chapman M; Hennekens C; Rader D. and Tall A.
Cholesteryl Ester Transfer Protein. A Novel Target for Raising HDL and Inhibiting Atherosclerosis.
Arterioscler Thromb Vasc Biol; 23: 160-167, 2003.

7-de Grooth G; Klerkx A; Stroes E; Stalenhoef A; Kastelein J. and Kuivenhoven J.
A review of CETP and its relation to atherosclerosis.
J. Lipid Res; 45: 1967-1974, 2004.

8-Zhong S; Sharp D; Grove J; Bruce C; Yano K; Curb J. and Tall A.
Increased coronary heart disease in Japanese-American men with mutation in the cholesteryl ester transfer protein gene despite increased HDL levels.
J. Clin. Invest; 97: 2917-2923, 1996.

9-Birjmohun R; Hutten B; Kastelein J. and Stroes E.
Efficacy and safety of high-density lipoprotein cholesterol-increasing compounds: a meta-analysis of randomized controlled trials.
J. Am. Coll. Cardiol; 45: 185-197, 2005.

10-Goldberg A; Alagona P; Capuzzi D; Guyton J; Morgan J; Rodgers J; Sachson R. and Samuel P.
Multiple-dose efficacy and safety of an extendedrelease form of niacin in
the management of hyperlipidemia.
Am. J. Cardiol; 85: 1100-1105, 2000.

11-Elchebly M; Porokhov B; Pulcini T; Berthezene F. and Ponsin G. Alterations in composition and concentration of lipoproteins and elevated cholesteryl ester transfer in non-insulin-dependent diabetes mellitus (NIDDM).
Atherosclerosis,123: 93-101; 1996.

12-MacLean P; Vadlamudi S; MacDonald K; Pories W. and Barakat H.
Suppression of hepatic cholesteryl ester transfer protein expression in obese humans with the development of type 2 diabetes mellitus.
J. Clin. Endocrinol. Metab; 90: 2250-2258, 2005.

13-Triplitt C; Reasner C. and Isley W.
Endocrinologic disorders in Pharmacotherapy 7 th ed; Ed. Dipiro J; Talbert R; Yee G; Matzke G; Wells B and Michael Posey L;
Pub. The McGraw-Hill Companies. 1245-1238, 2008.

14-Arai T. et al.
Increased plasma cholesteryl ester transfer protein in obese subjects. A possible mechanism for the reduction of serum HDL cholesterol levels in obesity.
Arterioscler Thromb; 14(7): 1129-1136, 1994.

15-MacLean P; Bower J; Vadlamudi S; Green T. and Barakat H.
Lipoprotein subpopulation distributions in lean, obese, and type 2 diabetic women: a comparison of African and white Americans.
Obes Res; 8: 62-70, 2000.

16-de Grooth G; Smilde T; van Wissen S; Klerkx A; Zwinderman A; Fruchart J; Kastelein J; Stalenhoef A. and Kuivenhoven J.
The relationship between cholesteryl ester transfer protein levels and risk factors in patients with familial hyper-cholesterolemia.
Atherosclerosis; 173: 261-267, 2004.

المجلد 7 , العدد 1 , ذو القعدة 1434 - تشرين أول (أكتوبر) 2013

SCLA