بحث في أعداد المجلة الجملة   المؤلف

المجلد 7 , العدد 1 , ذو القعدة 1434 - تشرين أول (أكتوبر) 2013   دراسة التعدد الشكلي لجين مستقبل الفيتامين د باستخدام إنزيم BsmI لدى مرضى سوريين مصابين بالداء السكري من النمط الأول ولدى أفراد أصحاء Study of Vitamin D Receptor BsmI Gene Polymorphism in Syrian Type 1 Diabetic Patients and Healthy Subjects د. سماح المبارك و أ. د. شادن حداد Al-Moubarak S. and Haddad Sh. كلية الصيدلة، جامعة دمشق Faculty of Pharmacy, Damascus University. الملخص Abstract يعد السُّكَّرِيّ من النمط الأول (T1D) مرضاً متعدد العوامل، وينتج عن التآثر بين العوامل الجينية والبيئية التي تؤدي إلى استجابة مناعية ذاتية ضد مستضدات الخلايا بيتا البنكرياسية. يجري التعبير عن مستقبل الفيتامين د في العديد من أنماط الخلايا المناعية، التي تتورط في إمراضية T1D والمعروفة بتأثيراتها على استجابات السيتوكينات. ولقد أثبتت العديد من الدراسات وجود علاقة بين التعدد الشكلي BsmI لجين مستقبل الفيتامين د و T1D. هدفت الدراسة إلى اختبار الارتباط بين التعدد الشكلي BsmI لجين مستقبل الفيتامين د والاستعداد الجيني للإصابة بالسكري من النمط الأول لدى مرضى سوريين. أجري تنميط جيني لـ 55 مريضاً بالسكري من النمط الأول و لـ 50 من الشواهد من أجل تعدد أشكال النُوكْلِيُوتيد المفرد BsmI بإجراء تفاعل البوليميراز التسلسلي وتحليل تعدد أشكال الشدف مقيدة الطول restriction fragment length polymorphism (RFLP) باستخدام إنزيم BsmI. كان تواتر الأليل b لدى مجموعة المرضى (71) أعلى منه عند المجموعة الشاهدة (46)، في حين أن تواتر الأليل B لدى المجموعة الشاهدة (54) كان أعلى منه لدى مجموعة المرضى (39). وكان هذا الاختلاف في توزع الألائل بين مجموعة المرضى والمجموعة الشاهدة معتداً به إحصائياً (x2=7.302, P=0.007). أظهرت دراستنا أن الأليل b مرتبط مع السكري من النمط الأول لدى أفراد سوريين.   Type I diabetes (T1D) is a multi-factorial disease, and it is a result of interactions between genetic and environmental factors that lead to autoimmune response to pancreatic Β cells antigens. Vitamin D receptor is expressed in many types of immune cells, that is involved in T1D pathogenesis and known for its effects on cytokines responses. A lot of studies have confirmed an association between vitamin D receptor BsmI gene polymorphism and T1D. The study aimed to test an association between VDR BsmI polymorphism and the genetic susceptibility to type 1diabetes in Syrian population. 55 patients with type 1diabetes and 50 controls were genotyped for the BsmI single nucleotide polymorphism by polymerase chain reaction and restriction fragment length polymorphism analysis. The b allele frequency was higher in patients group (71) than in controls (46), whereas the B allele frequency was higher in controls (54) than in patients (39), and this difference in distribution between patients and controls was statistically significant (x2=7.302, P=0.007). Our study showed that the b allele is related with type 1 diabetes mellitus in Syrian population.   المقدمة Introduction  يُعد السكري من النمط الأول مرضاً متعدد العوامل ينتج عن التآثر بين العوامل الوراثية والعوامل البيئية (1). بما أن هذا المرض ينتشر عادةً عند الأفراد الأصغر عمراً، فإن معظم المرضى يعانون من الاختلاطات مدى الحياة، ولذلك فمن الهام جداً معرفة العوامل المؤثرة في الإصابة بهذا المرض وسبل الوقاية منه (2). إن الإنتانات الفيروسية (3، 4)، والغلوتين والبروتينات الأخرى المشتقة من الحبوب (5)، وحليب الأبقار (6، 7)، ولقاح BCG (8)، وعوز الفيتامين د (9)، كلها من العوامل البيئية المرشحة. ولقد أظهر تطبيق الفيتامين د على النماذج الحيوانية المصابة بالسكري من النمط الأول أنه يساهم في الوقاية من المرض (10). وعند البشر، أثبتت الدراسات الوبائية أن المعالجة الفموية الداعمة بالفيتامين د في الطفولة الباكرة وفي مرحلة الرضاعة تنقص اختطار الإصابة بالسكري من النمط الأول (11، 12). وإن تناول الأم للفيتامين د أثناء الحمل يمكن أن يُحصن من المناعة الذاتية الموجهة ضد الجزيرات البنكرياسية عند ذريتهن (13-15). وبناءً على ذلك فإن المعالجة التداخلية بتطبيق الفيتامين د على الأفراد ذوي الاختطارات العالية للإصابة ينبغي أن تؤخذ بعين الاعتبار. وتعد هذه الطريقة مقنعة لأن مستقبل الفيتامين د يجرى التعبير عنه في الخلايا التائية CD4 (9)، وهي خلايا مناعية مفتاحية في تطور السكري من النمط الأول، الذي يعد أحد أمراض المناعة الذاتية المتواسطة بالخلايا التائية المساعدة 1(Th1) (16). بالإضافة إلى ذلك فإن مركبات الفيتامين د معروفة بقدرتها على تثبيط تفعيل الخلايا التائية عن طريق الارتباط إلى مستقبل الفيتامين د (17)، ولذلك فإنه من المحتمل ارتباط التعددات الشكلية لجين مستقبل الفيتامين د مع أمراض المناعة الذاتية المتواسطة بالخلايا التائية (18). يعبر الفيتامين د عن أفعاله عن طريق مستقبل الفيتامين د vitamin D receptor (VDR) (19). وينتمي VDR إلى طائفة المستقبلات الستيرويدية ويعد من عوامل الانتساخ المفعلة بالجين (20)، ويتم التعبير عنه في العديد من الخلايا ومن بينها اللمفاويات والبلاعم (21)، كما أن خلايا بيتا البنكرياسية تعبر عن VDR وهذا يدعم دوره في وظيفة الخلايا بيتا المنتجة للأنسولين. ولقد ذكر وجود علاقة للتعددات الشكلية لجين VDR مع إفراز الإنسولين (22). يتوضع جين VDR على الموقع الصبغي (12-12q14)، ويحتوي العديد من مناطق التعددات الشكلية التي يمكن أن تؤثر في فعالية المستقبل وبالتالي اختلاف مستويات الاستجابة للفيتامين د تبعاً للاختلافات الوراثية (23، 24). على كل حال، وبما أن الخلفية الوراثية للمرضى تختلف، فإنه من المهم معرفة أي الأشخاص هم في اختطار وراثي أعلى مرتبط بالفيتامين د وذلك من أجل إمكانية تطبيق مثل هذه المقاربات في التحصين من الإصابة بالسكري من النمط الأول (9).   المواد والطرق Materials and Methods   المرضى Patients شملت هذه الدراسة 55 مريضاً سورياً (25 ذكراً و30 أنثى) جرى مسبقاً تشخيص إصابتهم بالسكري من النمط الأول. جُمعت العينات من عيادات السكري (العيادات الشاملة في مدينة دمشق، مركز 8 آذار الصحي في مدينة دمشق، مركز طب الأسرة في مدينة نوى بمحافظة درعا). تراوحت أعمار المرضى بين 7-58 عاماً. أُخذت مجموعة من البيانات من المرضى أو من أهل المرضى الأطفال وتضمنت العمر عند تشخيص السكري من النمط الأول والذي تراوح بين 15 يوماً و26 عاماً (المتوسط 13.75 والانحراف المعياري 6.91)، بالإضافة إلى منسب كتلة الجسم ووجود تاريخ عائلي للإصابة. كما شملت هذه الدراسة 50 فرداً كمجموعة شاهدة (22 ذكراً، و28 أنثى) تراوحت أعمارهم بين 26–66 عاماً، وإن ميزة هذه المجموعة العمرية هي الاحتمالية الضئيلة لإمكانية إصابتهم بالسكري من النمط الأول في المستقبل حسب تعريف منظمة الصحة العالمية للسكري من النمط الأول. واختلاف العمر بين مجموعة المرضى والمجموعة الشاهدة لا يؤثر في نتائج هذه الدراسة لأنها تتحرى التعدد الشكلي للجين وهو لا يتأثر بالعمر. جرى الحصول على الموافقة المستنيرة، من المرضى أو من ذوي المرضى الأطفال، قبل أخذ عينات الدم لاستخدامها لأغراض البحث العلمي. معايير الاستبعاد Exclusion criteria استبعد الأشخاص الذين تربطهم صلة قربى في كل من مجموعة المرضى والمجموعة الشاهدة لكي لا يتأثر توزع الألائل بوجود هذه الصلة. وفي مجموعة المرضى جرى استثناء المرضى الذين شخص مرضهم بعمر أكبر من 30 عاماً، لعدم إمكانية التأكد من نمط السكري لدى هذه المجموعة ضمن الدراسة. وجرى التأكد من عدم معاناة أفراد المجموعة الشاهدة من أي مرض مناعي ذاتي أو من السكري النمط الأول أو النمط الثاني لتأثر هذه الحالات بالتعددات الشكلية لجين مستقبل الفيتامين د، كما نفى الجميع وجود أقارب لهم من الدرجة الأولى يعانون من السكري النمط الأول أو النمط الثاني.   الطرق Methods  استخلاص الدنا DNA isolation جُمع 3 مل من الدم في أنابيب EDTA–K3 من كل مشارك في الدراسة. وقسمت العينة في أنابيب ايبندورف، غلفت بالبارافيلم وحفظت في درجة حرارة -20C° لفترة زمنية لا تتجاوز الأسبوع إلى حين استخلاص الدنا الذي جرى باستخدام عتيدة QIAamp Blood minikit لشركة (Qiagen, Germany). التنميط الوراثي Genotyping استعرض تتالي جين VDR وجرى تضخيم المنطقة مقيدة الطول الحاوية على التعدد الشكلي باستخدام إنزيم BsmI بتفاعل البوليميراز التسلسلي PCR باستخدام عتيدة PCR Master Mix *2 لشركة Fermentas وذلك باستخدام المشرعين التاليين: For 5'CAACCAAGACTACAAGTACCGCGTCAGTGA-3' Rev 5'AACCAGCGGGAAGAGGTCAAGGG-3' من شركة VBC النمساوية. كما جرى استخدام البرنامج الحراري التالي: 95 م° لمدة 5 دقائق، 30 دورة من النظام التالي: تمسخ الدنا بدرجة حرارة 95C° لمدة دقيقة، ثم الالتحام مع المشرع بدرجة حرارة 56 C°لمدة دقيقة، ثم إطالة بدرجة حرارة 72 C°لمدة دقيقة. والإطالة النهائية بدرجة حرارة 72 C°لمدة 10 دقائق، وذلك بناء على دراسة Shimada A. et al. ، 2008. جرى تظهير ناتج تفاعل PCR بالرحلان الكهربائي على هلامة الأغاروز 2% وذلك للتأكد من نجاح تفاعل التضخيم. ثم هُضمت العينات باستخدام إنزيم BsmI بدرجة حرارة 37 C°لمدة خمس ساعات، ومن ثم جرى إظهار نواتج الهضم بالرحلان الكهربائي على هلامة الأغاروز 2%. الدراسة الإحصائية Statistical analysis جرى حساب الانحراف عن معادلة Hardy–Weinberg للتأكد من مطابقة تواتر الأنماط الجينية genotype frequencies لتواتر الألائل Allelic frequencies، حيث أنه يجب أن تتحقق المعادلتين التاليتين في كل من مجموعة المرضى والمجموعة الشاهدة Allele frequency: p + q=1 Genotype frequency: p2 + 2pq + q2 = 1 حيث أنه من أجل تعدد شكل على مورثة معينة يوجد ألليلين (وهما الأليل B والأليل b في حالة التعدد الشكلي BsmI على مورثة VDR). يرمز p لتواتر الأليل الأول و q تواتر الأليل الثاني. يعبر p2 عن تواتر النمط الوراثي BB و q2 يعبر عن تواتر النمط الوراثي bb و 2pq يعبر عن تواتر النمط الوراثي Bb. تمت المقارنة بين توزع الألائل ضمن المجموعات باستخدام اختبار كاي مربع واستخدم برنامج IBM SPSS statistics 20 للحسابات الإحصائية.   النتائجResults   جرى في هذه الدراسة تحري التعدد الشكلي لجين VDR بالهضم بإنزيم Bsm I باسـتخدام تقنيـة PCR-RFLP عند مرضى T1D ومقارنته مع نتائج أفراد أصحاء. حيث يتحرى إنزيم Bsm I وجود موقع اقتطاع على جين VDR ويرمز للألليل الذي لا يحتوي على موقع الاقتطاع بحرف كبير B وللأليل الذي يحتوي موقع الاقتطاع بحرف صغير b، وبناء على ذلك تنتج لدينا ثلاثة أنماط وراثية BB، Bb وbb. كان تواتر الألائل وتواتر النمط الوراثي مطابقا لمعادلة Hardy-Weinberg في كل من مجموعة المرضى والمجموعة الشاهدة. ولقد جرى تظهير ناتج تفاعل PCR بالرحلان الكهربائي على هلامة الأغاروز 2% وذلك للتأكد من نجاح تفاعل التضخيم فظهرت النتيجة بشكل عصابة بطول 825 bp (الشكل 1). ثم هضمت العينات بإنزيم BsmI بدرجة حرارة 37 C° لمدة خمس ساعات، ومن ثم جرى إظهار نواتج الهضم بالرحلان الكهربائي على هلامة الأغاروز 2%، ففي حال زيجوتٌ مُتَمَاثِلَةُ الأَلائِل homozygote لوجود موقع الاقتطاع نتجت عصابتان بطول 650 و175 bp (النمط الوراثي bb)، أما في حال زيجوتٌ مُتَمَاثِلَةُ الأَلائِل لعدم وجود موقع الاقتطاع نتجت عصابة واحدة بطول 825 bp (النمط الوراثي BB)، وفي حال زَيْجوتٌ مُتَغَايِرَةُ الأَلائِلِ heterozygote ظهرت العصابات الثلاث السابقة (النمط الوراثي Bb) (الشكل 2). كان تواتر الأليل B مساوياً 39 لدى مجموعة المرضى السكريين، في حين كان تواتر الأليل b مساوياً 71، مقابل 54 للأليل B و46 للأليل b لدى المجموعة الشاهدة. وهذا يبدي فارقاً يعتد به إحصائياً (Χ2=7.302, P = 0.007, df = 1) في توزع الألائل بين مجموعة المرضى والمجموعة الشاهدة. إن الاختلافات في توزع الأنماط الوراثية وفي توزع الألائل بين مجموعة المرضى والمجموعة الشاهدة مذكورة في الجدول 1.     كان تواتر الأليل b عند إناث مجموعة T1D أعلى منه لدى إناث المجموعة الشاهدة (39/21)، في حين أن تواتر الأليل B كان أعلى لدى إناث المجموعة الشاهدة مقارنة مع إناث مجموعة T1D (35/21). وعند تطبيق اختبار كاي مربع تبين أن هذا الفارق يعتد به إحصائياً (Χ2=8.772, P = 0.003, df =1). عند مقارنة توزع الألائل عند مجموعة الذكور تبين أنه لا يوجد مثل هذا الفارق، على الرغم من أن تواتر الأليل b كان أعلى لدى المرضى الذكور منه لدى ذكور المجموعة الشاهدة (32/25)، وكان تواتر الأليل B مساوياً 18 لدى مجموعة المرضى مقابل 19 لدى المجموعة الشاهدة، حيث أنه بتطبيق اختبار كاي مربع تبين أن هذا الفارق لا يعتد به إحصائياً (Χ2=0.506, P = 0.477, df = 1) (الجدول2).   المناقشة Discussion  إن مستقبل الفيتامين د هو أحد أفراد المستقبلات النووية، وهو يقوم بتنظيم الانتساخ عن طريق التآثر مع العناصر المستجيبة للهرمون في منطقة المعزاز promoter للجينات الهدف، وذلك بعد ارتباطه مع اللجين الخاص به وهو1,25 (OH)2D3 (25). جرى وصف العديد من التأثيرات للفيتامين د ومضاهئاته على العوامل الأساسية في إمراضية T1D. حيث لوحظ تحريض لإفراز الإنسولين بفعل 1,25 (OH)2D3 في كل من المختبر والأحياء. علاوة على ذلك جرى تسجيل تأثيرات مباشرة لـ 1,25 (OH)2D3 في حماية الخلايا بيتا من الشدة الالتهابية والاستقلابية. من ناحية أخرى، وصفت تأثيرات هامة على عناصر الجهاز المناعي المتورطة في إمراضية T1D في كل من المختبر والأحياء، حيث يحرض 1,25 (OH)2D3 تمايز الوحيدات ويثبط تكاثر اللمفاويات وإفراز السيتوكينات، كما أمكن إحراز الوقاية من النكس بعد زرع الجزيرات بواسطة 1,25 (OH)2D3 ومضاهئاته، إما لوحدها وإما مع معدلات مناعية أخرى (26، 27، 28). إن هذه التأثيرات تطرح دور الفيتامين د كأحد العوامل البيئية التي يمكن التحكم بها، بإعطاء مكملات الفيتامين د، وأحد العوامل الوراثية التي تسبب عامل اختطار لدى مجموعات سكانية معينة وعامل وقاية لدى مجموعات أخرى، حيث أن بعض الأنماط الوراثية تسبب زيادة في اصطناع الفيتامين د في الجلد أو زيادة في الاستجابة للفيتامين د على المستوى الخلوي، في حين أن أنماطاً وراثيةً أخرى تتعلق بنتائج معاكسة (29). سجلت كذلك اختلافات في تأثيرات الأنماط الوراثية المختلفة لدى المجموعات السكانية المختلفة، فلقد كان الألليل B يحمل تأثيراً وقائياً من T1D لدى الأوروبيين (23)، وفي اليونان (30)، في حين ارتبط مع زيادة في حدوث T1D لدى الآسيويين (9). ولم تثبت أية علاقة لهذا التعدد الشكلي وحيد النوكليوتيد مع الإصابة لدى المرضى الإيرانيين (31)، أوالبرتغاليين (32)، حيث يمكن تفسير هذا الاختلاف في ضوء اختلال التوازن الارتباطي Linkage disequilibrium (LD)، فالتعدد الشكلي BsmI يقع على الإنترون 8 وهو بالتالي غير وظيفي، إلا أنه يرتبط بقوة مع تعددات أشكال أخرى غير وظيفية لجين VDR، مشكلاً أنماطاً فردانيةً محددةً لدى المجموعات السكانية المختلفة (33). ومن الممكن أنه يرتبط مع تعددات أشكال وظيفية، حتى لجينات أخرى لم تكتشف حتى الآن. علاوة على ذلك، فلقد ذُكر وجود LD قوي بين BsmI RFLP والتعدد الشكليpolyA variable number of tandem repeat الموجود على المنطقة المنظمة غير المترجمة 3َ (3'UTR)، حيث أن هذا الأخير يعرف بدوره في تنظيم ثباتية الرنا المرسال، وهو عبارة عن تبدل في عدد ثمالات الأدينوزين على القطعة عديدة الأدينوزين polyA-tract، التي تختلف بالعدد بين 12 و 18 ثمالة أدينوزين والتي تتبع نمطاً ثنائياً يرمز له بعديد الأدينوزين الطويل أو الألليل L، الذي يرتبط مع الألليل b، وعديد الأدينوزين القصير أو الألليل S، الذي يرتبط مع الألليل B. يبدو أن الأنماط الوراثية المرتبطة مع الألليل القصير تبدي استجابة خلوية أفضل من الأنماط الوراثية المرتبطة مع الألليل الطويل ويمكن أن يعزى ذلك إلى ثباتية أكبر للرنا المرسال. وهذا سوف يعطي بالنتيجة عددا أكبر من جزيئات VDR في الخلايا الهدفية. ويؤدي هذا إلى استجابة هذه الخلايا بشكل أفضل للفيتامين د (23). كما أثبت أن الأليل B يرتبط مع زيادة في وظيفة المستقبل ويرفع سوية upregulate التعبير عن البروتين المحرض بالفيتامين D (34). تفسر هذه الزيادة في الاستجابة للفيتامين د ظهور الألليل B كوقائي من الإصابة في هذه الدراسة. لقد جرى تسجيل اختلافات عرقية كبيرة في تواتر أنماط VDR الوراثية حتى لدى الأصحاء. كما أظهرت الدراسات على الآسيويين أن أكثر من 90% من الأفراد هم من النمط الوراثي bb (35). وعلى العكس كان نمط الزيجوت متغاير الألائل Bb هو الغالب لدى الأوروبيين (36، 37). وكذلك الأمر في الشرق الأوسط مثل لبنان واليونان وإيران وتركيا (29، 30، 31، 38) وهذا يتفق مع نتائج دراستنا. أثبت في دراسات أخرى أيضاً وجود علاقة بين الجنس وتأثير التعددات الشكلية لجين VDR على الإصابة بالسكري من النمط الأول دون ذكر تفسير لهذا الاختلاف (39). على كل فإن أهمية هذا الاختلاف من الصعب تقديرها في هذه الدراسة، حيث أن T1D يصيب عادة الذكور والإناث بشكل متساوٍ تقريباً، وهذا يطرح تساؤلاً فيما إذا كانت هذه العلاقة خاصة بالمجموعة المختارة في هذه الدراسة أكثر من كونه علاقة مع المرض بحد ذاته. وإن الحصول على تفسيرات أعمق يتطلب دراسات جزيئية أكثر مثل الدراسات العائلية. الاستنتاج تبين في هذا البحث أن وجود الأليل b لجين مستقبل الفيتامين د يؤهب للإصابة بالسكري من النمط الأول عند الإناث. وأن الأليل B يؤمن وقاية من الإصابة بالمرض.   المراجع References  1-Craig M.E; Hattersley A. and Donaghue K.C. Definition, epidemiology and classification of diabetes in children and adolescents. Pediatric Diabetes, 10 (Suppl. 12): 3-12, 2009. 2-Morran M.P; Omenn G.S. and Pietropaolo M. Immunology and Genetics of Type 1 Diabetes, Mount Sinai Journal of Medicine, 75:314-327, 2008. 3-Knip M. and Simell O. Environmental Triggers of Type 1 Diabetes. Cold Spring Harb Perspect Med, (2): a007690, 2012. 4-Van Belle T.L; Coppieters K.T. and Von Herrath M.G. Type 1 Diabetes: Etiology, Immunology, and Therapeutic Strategies. Physiol Rev, 91: 79-118, 2011. 5-Knip M; Veijola R; Virtanen S.M; Hy?ty H; Vaarala O. and ?kerblom H.K; Environmental Triggers and Determinants of Type 1 Diabetes. Diabetes, 54 (S2):S125-S136, 2005. 6-Virtanen S.M; Kenward M.G; Erkkola M; Kautiainen S; Kronberg-Kippil? C; Hakulinen T; Ahonen S; Uusitalo L; Niinist? S; Veijola R; Simell O; Ilonen J. and Knip M. Age at introduction of new foods and advanced beta cell autoimmunity in young children with HLA-conferred susceptibility to type 1 diabetes. Diabetologia, 49: 1512–1521, 2006. 7-Ziegler A.G; Schmid S; Huber D; Hummel M. and Bonifacio E. Early Infant Feeding and Risk of Developing Type 1 Diabetes-Associated Autoantibodies. JAMA, (2003); 290: 1721-1728. 8-Huppmann M; Baumgarten A.D; Ziegler A.G. and Bonifacio E. Neonatal Bacille Calmette-Guerin Vaccination and Type 1 Diabetes. Diabetes Care, 28 (5):1204-1206, 2005. 9-Shimada A; Kanazawa Y; Motohashi Y; Yamada S; Maruyama T; Ikegami H; Awata T; Kawasaki E; Kobayashi T; Nakanishi K; Kawabata Y; Kurihara S; Uga M; Tanaka Sh. Evidence for association between vitamin D receptor BsmI polymorphism and type 1 diabetes in Japanese. Journal of Autoimmunity, 30:207-211, 2008. 10-Mathieu C; Gysemans C; and Bouillon R. Vitamin D and Diabetes in “VITAMIN D” 2nd edition, Feldman, Pike, and Glorieux, Pub Elsevier, 1763-1777, 2005. 11-Hypponen E; L??r? E; Reunanen A; J?rvelin M.R. and Virtanen S.M. Intake of vitamin D and risk of type 1 diabetes: a birth-cohort study. Lancet, 358:1500-1503, 2001. 12-The EURODIAB Substudy 2 Study Group, Vitamin D supplement in early childhood and risk for Type I (insulin-dependent) diabetes mellitus. Diabetologia, 42: 51-54, 1999. 13-Marjam?ki L; Niinist? S; Kenward M. G; Uusitalo L; Uusitalo U; Ovaskainen M.L; Kronberg-Kippil? C; Simell O; Veijola R; Ilonen J; Knip M. and Virtanen S.M. Maternal intake of vitamin D during pregnancy and risk of advanced beta cell autoimmunity and type 1 diabetes in offspring, Diabetologia, 53: 1599-1607, 2010. 14-Fronczak C.M; Baron AE, Chase HP et al. In utero dietary exposures and risk of islet autoimmunity in children. Diabetes Care, 26: 3237, 2003. 15-Stene L.C; Ulriksen J; Magnus P. and Joner G. Use of cod liver oil during pregnancy associated with lower risk of type 1 diabetes in the offspring. Diabetologia, 43: 1093-1098, 2000. 16-Todd J.A. Etiology of Type 1 Diabetes. Immunity, 32: 457-467, 2010. 17-Mathieu C; Gysemans C. Vitamin D and diabetes, Diabetologia, 22 (3): 187-193, 2006. 18-Ascherio A; Munger K.L. and Simon K.C. Vitamin D and multiple sclerosis. Lancet Neurol, 9: 599-612, 2010. 19-Seuter S; Heikkinen S. and Carlberg C. Chromatin acetylation at transcription start sites and vitamin D receptor binding regions relates to effects of 1a,25-dihydroxyvitamin D3 and histone deacetylase inhibitors on gene expression. Nucleic Acids Research, 41 (1):110-124, 2013. 20-Campbell F.C; Haibo Xu; El-Tanani M; Crowe P. and Bingham V. The Yin and Yang of vitamin D receptor (VDR) signaling in neoplastic progression: Operational networks and tissue-specific growth control. Biochemical Pharmacology, 79 (1): 1-9, 2010. 21-Raimondi S; Johansson H; Maisonneuve P. and Gandini S. Review and meta-analysis on vitamin D receptor polymorphisms and cancer risk. Carcinogenesis, 30 (7):1170-1180, 2009. 22-Al-Daghri N.M; Al-Attas O; Alokail M.S; Alkharfy Kh. M; Draz H.M; Agliardi C; Mohammed A.K; Guerini F.R. and Clerici M. Vitamin D Receptor Gene Polymorphisms and HLA DRB1*04 Cosegregation in Saudi Type 2 Diabetes Patients. J Immunol, 188: 1325-1332, 2012. 23-Uitterlinden A.G; Fang Y; van Meurs J.B.J; Pols H.A.P; van Leeuwen J.P.T.M. Genetics and biology of vitamin D receptor polymorphisms. Gene, 338: 143-156, 2004. 24-Dowd D.R. and MacDonald P.N. The Molecular Biology of the Vitamin D Receptor" in Nutrition and Health: Vitamin D 2nd Edition, Ed. Holick M.F. Pub. Human press, 135-152, 2010. 25-Haussler M.R; Whitfield G.K; Kaneko I; Haussler C.A; Hsieh D; Hsieh J.Ch; Jurutka P.W. Molecular Mechanisms of Vitamin D Action. Calcified Tissue International, 92 (2): 77-98, 2013. 26-Ogunkolade B.W; Boucher B.J; Prah J. M; Bustin S. A; Burrin J. M; Noonan K; North B.V; Mannan N; McDermott M.F; DeLuca H.F. and Hitman G. A. Vitamin D Receptor (VDR) mRNA and VDR Protein Levels in Relation to Vitamin D Status, Insulin Secretory Capacity, and VDR Genotype in Bangladeshi Asians. Diabetes, 51: 2294-2312, 2002. 27-Alvarez J.A. and Ashraf A. Role of Vitamin D in Insulin Secretion and Insulin Sensitivity for Glucose Homeostasis, Hindawi Publishing Corporation. International Journal of Endocrinology, Volume 2010, Article ID 351385, 18 pages, doi:10.1155/2010/351385 28-Valdivielso J.M. and Fernandez E. Vitamin D Receptor Polymorphisms and Diseases, Clinica. Chimica. Acta; 371: 1-12, 2006. 29-Arabi A; Mahfoud Z; Zahed L; El-Onsi L. and El-Hajj Fuleihan G. Effect of age, gender and calciotropic hormones on the relationship between vitamin D receptor gene polymorphisms and bone mineral density. European Journal of Clinical Nutrition, 64: 383-391, 2010. 30-Panierakis Ch; Goulielmos G; Mamoulakis D; Petraki E; Papavasiliou E. and Galanakis E. Vitamin D receptor gene polymorphisms and susceptibility to type 1 diabetes in Crete, Greece. Clinical Immunology, 133 (2): 276-281, 2009. 31-Mohammadnejad Z; Ghanbari M; Ganjali R; Afshari J.T; Heydarpour M; Taghavi S.M; Fatemi S. and Rafatpanah H. Association between vitamin D receptor gene polymorphisms and type 1 diabetes mellitus in Iranian population. Mol Biol Rep, 39:831-837, 2012. 32-Lemos M.C; Fagulha A; Coutinho E; Gomes L; Bastos M; Barros L; Carrilho F; Geraldes E; Regateiro F.J. and Carvalheiro M. Lack of association of vitamin D receptor gene polymorphisms with susceptibility to type 1 diabetes mellitus in the Portuguese population. Human Immunology, 69: 134-138, 2008. 33-Smith G. D. and Ebrahim Sh. Mendelian randomization: prospects, potentials, and limitations, International Journal of Epidemiology, 33: 30-42, 2004. 34-Turpeinen H; Hermann R; Vaara S; Laine A.P; Simell1 O; Knip M; Veijola R; and Ilonen J. Vitamin D receptor polymorphisms: no association with type 1diabetes in the Finnish population. European Journal of Endocrinology, 149: 591-596, 2003. 35-Fang W.L; Gao L.B; Liang W.B; Xue H; Bai P; Lv M.L; Wang Y.Y; Zhou B. and Zhang L. Association Analysis of Vitamin D Receptor Gene Polymorphisms in Chinese Population with Asthma. Iran J Allergy Asthma Immunol, 8 (3): 141-147, 2009; 36-Horst-Sikorska W; Dytfeld J; Wawrzyniak A; Marcinkowska M; Michalak M; Franek E; Napiorkowska L; Drweska N. and S?omski R. Vitamin D receptor gene polymorphisms, bone mineral density and fractures in postmenopausal women with osteoporosis. Mol Biol Rep, 40: 383-390, 2013. 37-Mostowska A; Lianeri M; Wudarski M; Olesinska M. and Jagodzinski P.P. Vitamin D receptor gene BsmI, FokI, ApaI and TaqI polymorphisms and the risk of systemic lupus erythematosus. Mol Biol Rep, 40: 803-810, 2013. 38-Dilmec F; Uzer E; Akkafa F; Kose E. and Kuilenburg A.B.P. Detection of VDR gene ApaI and TaqI polymorphisms in patients with type 2 diabetes mellitus using PCR-RFLP methods in a Turkish population. Journal of Diabetes and Its Complications, 24: 186-191, 2010. 39-Balazs G; Vasarhelyi1 B; Krikovszky D; Madacsy L; Tordai A; Tulassay T. and Szabo A. Gender-specific association of vitamin D receptor polymorphism combinations with type 1 diabetes mellitus. European Journal of Endocrinology, 147: 803-808, 2002.   المجلد 7 , العدد 1 , ذو القعدة 1434 - تشرين أول (أكتوبر) 2013 SCLA