| المجلد 7 ,
العددان 3-4
, رمضان 1435 - تموز (يوليو) 2014 |
| |
| دور Bcl-2 المصلي في سرطان الثدي الناكس |
| The Role of Bcl-2 in the Recurrent Breast Cancer |
| د. رنا حاجي علي وأ. د. جمانة الصالح |
| Rana Hajiali and Jumana AL Saleh |
كلية الصيدلة، جامعة دمشق
Faculty of Pharmacy, Damascus University
|
| الملخص Abstract |
| يعد حدوث النكس من المشاكل الأساسية التي تظهر عند 40% من مريضات سرطان الثدي. وBcl-2 هو بروتين مضاد للاستماتة والذي يرتبط بالعديد من حالات تطور السرطان ومقاومة المرض للعلاج. استقصينا في هذه الدراسة دور Bcl-2 في حدوث النكس لدى مريضات سرطان الثدي. فجُمعت عينات دم من 25 امرأة سليمة (شاهد) و60 مريضة مصابة بسرطان الثدي الأولي. حُللت عينات المصل من أجل مقايسة تركيز كلٍ من Bcl-2 وANAs وanti-dsDNA antibodies باستخدام طرق ELISA. كان هنالك ارتفاع في مستويات Bcl-2 المصلية لدى مريضات سرطان الثدي، بالمقارنة مع مجموعة الشاهد الصحيحة، كما كان هنالك ارتفاع هام في مستويات Bcl-2 لدى المريضات الناكسات. بالإضافة إلى ذلك، كان عيار أضداد المناعة الذاتية منخفضاً لدى المريضات اللاتي لديهن مستويات مرتفعة من Bcl-2 وذلك بالمقارنة مع المريضات ذوات المستويات الأقل من Bcl-2. وجدنا أنه ليس هنالك دور للـ Bcl-2 في نكس سرطان الثدي ومن المحتمل أن يعود ذلك إلى تأثيره السلبي على إنتاج أضداد المناعة الذاتية. |
| Recurrence is a major problem which affects 40% of Breast cancer patients. Bcl-2 is an anti-apoptotic protein, which is implicated in many cases of cancer development and cancer resistance to therapy. In this study we investigate the role of Bcl-2 in recurrence in Breast cancer patients. Blood samples were collected from 25 healthy individuals (control) and from 60 primary Breast cancer patients. The serum samples were analyzed for measurement of Bcl-2, ANAs and anti-dsDNA antibodies using ELISA techniques. There was elevation in the serum levels of Bcl-2 in breast cancer patients, comparing to healthy controls, and there was significant elevation in Bcl-2 levels in patients suffering from recurrence. In addition, patients with higher levels of Bcl-2 had decreased titer of auto-antibodies, comparing to patients with lower levels of Bcl-2. We found that there is a role of Bcl-2 in Breast cancer recurrence, and that may be due to its negative effect on auto-antibodies production. |
| المقدمة Introduction |
يشكل سـرطان الثدي مشكلة صحية هامـة على مستوى العالم، حيث أنه أكثر السرطانات شيوعاً لدى النساء، كما يُعد سرطان الثدي السبب الرئيس للوفيات المتعلقة بالسرطانcancer-related deaths (1). تعاني حوالي 40% من مريضات سرطان الثدي من النكس recurrence والذي يعد السبب الرئيس للوفيات المرتبطة بالسرطان (2). يتعلق تطور السرطان بوجود خلل في التوازن مابين الخسارة الخلوية والفعالية التكاثرية، تقوم فيها الخلايا الورمية tumor cell بالتهرب من عملية الاستماتة apoptosis الأساسية في هذا التوازن، مما يضمن بقاء الخلية السرطانية (3). يقوم بروتين Bcl-2 بدور مضاد للاستماتة antiapoptotic، حيث يؤدي فرط التعبير over expression عن بروتين Bcl-2 إلى تطاول زمن حياة الخلية فتتراكم الطفرات في هذه الخلية (4). جرى تعريف جين Bcl-2 (B-cell lymphoma 2) لأول مرة في اللِمْفُومةٌ الجريبية follicular B cell lymphoma، حيث وجد إزفاء صبغوي chromosomal translocation t(14-18) في معظم خلايا اللِمْفُومةٌ، والذي يتوضع بنتيجته جين Bcl-2 بجوار موضع السلسلة الثقيلة لأحد الغلوبولينات المناعية، مما يؤدى إلى زيادة التعبير عن بروتين Bcl-2 (3). بعد ذلك توالت الدراسات التي وجدت زيادة في التعبير عن Bcl-2 في عدة خباثات، منها سرطان الثدي، ووجد أن التعبير المتزايد عن بروتين Bcl-2 يزيد من تطور سرطان الثدي (3)، كما جرى الربط في عدة دراسات بين زيادة التعبير عن Bcl-2 وبين المقاومة على العلاج الكيميائي المضاد للسرطان (5).
تهدف هذه الدراسة إلى استقصاء وجود Bcl-2 في مصول مريضات سرطان الثدي والبحث عن دور Bcl-2 في النكس وتشكل النقائل والاستجابة على العلاج وتأثير العلاج على مستويات الواصمات الثلاث Bcl-2، antinuclear antibodies، anti-dsDNA antibodies.
|
| المواد والطرق Materials and Methods |
تصميم الدراسة: دراسة حالات شواهد case-control study تضمنت 85 سيدة موزعة ضمن مجموعتين: مجموعة المريضات وضمت 60 (70.59%) مريضة سرطان ثدي 42 مريضة stage II، 18 مريضة stage I خاضعات للعلاج الجراحي، تراوحت أعمارهن بين 21 و65 عاماً والمجموعة الشاهدة وضمت 25 (29.31%) سيدة سليمة ظاهرياً تراوحت أعمارهن بين 25 و55 عاماً. وجُمعت عينة مصل من كل مريضة بعد خضوعها لعملية استئصال جراحي للورم. بعد ذلك خضعت كل من المريضات لست دورات علاجية من العلاج الكيميائي المضاد للسرطان. وجرت متابعة استجابة المريضات على العلاج من قبل الطبيب السريري المشرف، كما جرى الحصول على المعلومات المختلفة المتعلقة بحالة المريضة السريرية من أضابير المريضات في أرشيف مستشفى البيروني. وحدث نكس لدى أربع مريضات، حيث جرى تشخيص نكس موضعي لديهن أو نكس تحت الإبط من الجانب نفسه، بينما أبدت 51 مريضة استجابة جيدة، ولم يكن هنالك وجود لأي دليل على ورم ناكس أو نقائل بعيدة مشخصة وذلك حتى نهاية مدة الدراسة. في حين أبدت خمس مريضات نقائل بعيدة وجرى استثناء هـذه المجموعة من الدراسة الاحصائية.
الاعتيان
جُمع من كل مريضة 5 مل من الدم على أنبوب جاف وذلك في مستشفى البيروني، ثم نبذت العينات بسرعة 1200xg لمدة خمسة عشرة دقيقة ووزع المصل الناتج على أربعة أنابيب ايبندورف وحفظت بدرجة حرارة -60 Cْ في المجمدة الخاصة بالمستشفى إلى حين إجراء المقايسة.
المواد والأجهزة المستخدمة
• عتيدة ELISA لمقايسة مستوى Bcl-2 المصليRepublic- X12-083) biovendor-Czech).
• عتيدة ELISA لمقايسة أضداد anti-dsDNA antibodies في المصل (Human-Germany-12001).
• عتيدة ELISA لمقايسة أضداد anti-nuclear antibodies(Human-Germany-12003).
• منبذة (HettichRotixa/ks-Germany).
• جهاز ELISA (Elisys Uno-human-Germany).
أجريت كامل المقايسات بشكل آلي في مختبر الدمويات في كلية الصيدلة. ومن أجل كل عينة جرت مقايسة antibodiesanti-dsDNA وANA وBcl-2 بطريقة مُقَايَسَةُ المُمْتَزِّ المَناعِيِّ المُرْتَبِطِ بالإِنْزِيْم ELISA، حسب النشرة المرفقة مع العتيدة. فلقد جرت مقايسة Bcl-2 في مصول المريضات باستخدام عتيدة لشركة Biovendor. ويعتمد مبدأ كشف أضداد Bcl-2 باستخدام هذه العتيدة على طريقة ELISA، حيث تكون الأضداد anti-human Bcl-2 ممتزة على سطح طبق المقايسة، وبناءً عليه جرى تحديد تركيز Bcl-2 ng/ml)) في عينة المصل وعيار أضداد anti-dsDNA ((IU/ml وعيار أضداد النوى ANAs (U/ml).
الدراسة الاحصائية
جرى التعبير عن القيم المختلفة بحساب المتوسط الحسابي لكل مجموعة ± الانحراف المعياري.
اعتمد اختبار T student لتحديد كون الفارق بين المتوسطات ناجماً عن الصدفة أم أنه فارق معتد به إحصائياً، كما اعتمدت قيمة P<0.05 للاعتداد الإحصائي.
|
| النتائج results |
* كان متوسط المستوى المصلي لـ Bcl-2 أعلى لدى مجموعة المريضات 22.8914.2 ng/ml من المجموعة الشاهدة 14.561.52 ng/ml وذلك بدرجة يُعتد بها إحصائياً (p<0.001) (الشكل 1).
* كانت مستويات Bcl-2 المصلي أعلى لدى المريضات الناكسات 22.905.79 ng/ml، (الشكل 2)، بالمقارنة مع المريضات اللاتي أبدين استجابة جيدة 19.563.30 ng/ml وذلك بدرجة يُعتد بها إحصائياً (p=0.04).
* عند مقارنة عيار أضداد anti-dsDNA antibodies بين مجموعة المريضات الخاضعات للعلاج اللاتي كان مستوى Bcl-2 في المصل لديهن مساوٍ لمستواه في المجموعة الشاهدة أو أقل Bcl-2≤14.56 ng/ml، ومجموعة المريضات الخاضعات للعلاج اللاتي كان مستوى Bcl-2 في المصل لديهن عالياً Bcl-2> 14.56 ng/ml، وجد أن عيار anti-dsDNA antibodies كان أعلى لدى المجموعة الأولى IU/ml 10.67±21.02، IU/ml 4.55±18.05، على الترتيب. وكان الفارق معتداً به إحصائياً (p=0.04).
* عند مقارنة عيار antinuclear antibodies بين مجموعة المريضات الخاضعات للعلاج اللاتي كان مستوى Bcl-2 في المصل لديهن مساوٍ للمجموعة الشاهدة أو أقل Bcl-2<14.56 ng/ ml، ومجموعة المريضات الخاضعات للعلاج اللاتي كان مستوى Bcl-2 في المصل لديهن عالياًBcl-2>14.56 ng/ml، وجد أن عيار anti nuclear antibodies كان أعلى لدى المجموعة الأولى، وذلك بفارق غير معتد به إحصائياً، 5.13±25.02 U/ml، 14.94±20.05 U/ml، على الترتيب. وكان الفارق غير معتد به إحصائياً (p=0.26) (الجدول 1). ترافقت مستويات Bcl-2 المنخفضة مع عيارات الأضداد المناعيةanti-dsDNA antibodies- الأعلى وذلك مقارنة بالمريضات اللاتي كان لديهن مستويات مرتفعة من Bcl-2 بعد العلاج. ولم يكن هنالك فارق معتد به إحصائياً في عيار ANAs بين المجموعتين.
|
 |
| المناقشة Discussion |
وجدت عدة دراسات ارتفاع مستوى Bcl2 المصلي في عدد من الخباثات مثل سرطان المبيض (6)، وسرطان الرئة (7). وفي هذه الدراسة وجدنا ارتفاعاً يعتد به إحصائياً في مستوى Bcl-2 المصلي لدى مريضات سرطان الثدي، مقارنة بالمجموعة الشاهدة. وتوافقت نتائجنا مع نتائج دراسة 2011 Mahdy et al. (8)، مما يدل على إمكان استخدام Bcl-2 المصلي كواصم مصلي لتشخيص المرض، كما يدل على دور محتمل للـ Bcl-2 في تطور سرطان الثدي (9). ولدى المريضات الناكسات وجدنا ارتفاع مستوى Bcl-2 المصلي، مقارنة بالمريضات اللاتي أبدين استجابة جيدة على العلاج الكيميائي المضاد للسرطان. ونفسر هذه النتيجة بأن الخلايا الورمية التي لم تستجب على العلاج وبالتالي أعطت الورم الناكس هي الخلايا التي طورت آليات لمقاومة إشارة الاستماتة المحرضة بالعلاج المضاد للورم عن طريق زيادة التعبير عن Bcl-2، باعتبار أن تحريض الاستماتة في الخلايا الورمية هو أحد أهم الآليات التي تعتمد عليها العلاجات المضادة للسرطان من أجل قتل الخلية الورمية )10). أثبتت التجارب على الفئران أن الخلايا المستميتة apoptotic cells تحرض استجابة مناعية immune response وبالذات ارتفاعاً في أضداد النوى (11)، حيث تسبب الاستماتة تبدلات جزيئية molecular changes في مختلف المستضدات الذاتية auto-antigens، مما يحرض تشكل أضداد مناعية ذاتية ومنها أضداد النوى Antinuclear antibodies (12). كما تؤدي عملية الاستماتة إلى زيادة توافر availability المستضدات داخل خلوية ومنها المستضدات النووية التي يتم التعرف عليها recognition من قبل أضداد النوى(13)، وجدنا ترافق المستويات Bcl-2 المصلية المنخفضة مع ارتفاع عيار أضدادanti-dsDNA antibodies. وربما يشير هذا إلى تأثير سلبي لبروتين Bcl-2 على المناعة الخلطية بسبب دوره كمضاد للاستماتة وربما يكون هذا أحد العوامل في علاقة Bcl-2 مع النكس لدى مريضات سرطان الثدي. والذي يدعم هذه النتيجة التجارب التي أجريت على فئران التجربة والتي أظهرت أن الخلايا الورمية تحدث استجابة مناعية ضدية وأن هذه الأضداد تتمتع بسمية خلوية ضد الخلايا الورمية تتوسطها الاستماتة وتترافق مع تراجع في مستوى Bcl-2 (14).
الاستنتاج
وجدنا في هذه الدراسة أنه يمكن استخدام Bcl-2 كواصم حيوي Biomarker من أجل تشخيص سرطان الثدي ووجدنا دوراً سلبياً لـ Bcl-2 في الاستجابة المناعية الخلطية لدى مريضة سرطان الثدي المعالجة وفي استجابة الورم على الدواء المضاد للسرطان، لذا يمكن استخدام Bcl-2 المصلي من أجل تقييم العلاج لدى مريضات سرطان الثدي، كما وجدنا أن ارتفاع مستويات Bcl-2 المصلية قبل العلاج يمكن أن يكون مؤشراً للنكس.
|
| المراجع References |
1-IARC: international Agency for Research on cancer: World Cancer Report 2012, Breast Cancer Estimated Incidence, Mortality and Prevalence Worldwide in 2012: IARC.
2-Gerber B; Freund M. and Reimer T.
Recurrent breast cancer: treatment strategies for maintaining and prolonging good quality of life.
DtschArztebl Int. 2010; 107(6): 85-91.
3-Li X. and Qifeng Y.
Molecular Mechanism and Morphology in Cancer, The Role of Bcl-2 in Breast Cancer, Ed. Nakamura M and kakudo K, Pub. Bentham Science. 2009; 57-80.
4-Adams JM. and Cory S.
The Bcl-2 apoptotic switch in cancer development and therapy.
Oncogene. 2007; 26: 1324-1337.
5-Kang MH. and Reynolds C P.
Bcl-2 Inhibitors: Targeting Mitochondrial Apoptotic Pathways in Cancer Therapy.
Clin Cancer Res, 2009 (15); 1126.
6-Tas F; Duranyildiz D; Oguz H; Camlica H; Yasasever V. and Topuz E.
The value of serum bcl-2 levels in advanced epithelial ovarian cancer.
Med Oncol. 2006; 23(2): 213-217.
7-Tas F; Duranyildiz D; Oguz H; Camlica H; Oral EN; Yasasever V. and Topuz E.
The value of serum Bcl-2 levels in advanced lung cancer patients.
Med Oncol. 2005; 22(2): 139-143.
8-Mahdy EM; Shousha WG; Ahmed HH; Metwally FM. and Ramadan SS.
Significance of serum HGF, Bcl-2 and nitric oxide in primary breast cancer.
Nat Sci. 2011; 9(5): 34-41.
9-Ebied S.A; Abd El-Moneim N.A. et al.
The Diagnostic, Prognostic and Follow-up Value of Serum Bcl-2, Bax and p53 Proteins in Breast Cancer Patients: A Comparison with Serum CA 15-3,
Middle East J Cancer. 2013; 4(2): 51-62.
10-Fulda S. and Debatin KM.
Extrinsic versus intrinsic apoptosis pathways in anticancer chemotherapy.
Oncogene.2006 (25); 4798-4811.
11-Mevorach D; Zhou JL; Song X. and Elkon KB.
Systemic Exposure to Irradiated Apoptotic Cells Induces Autoantibody Production.
J Exp Med. 1998; 188(2): 387-392.
12-Ramírez-Sandoval R; Sánchez-Rodríguez SH; Herrera-van Oostdam D; Avalos-Díaz E. and Herrera-Esparza R.
Antinuclear antibodies recognize cellular autoantigens driven by apoptosis.
Joint Bone Spine. 2003; 70(3): 187-194.
13-Herrera-van Oostdam DA; Esparza-Ibarra E; Ramírez-Sandoval R; Ortíz V; Bollain-y-Goitia JJ; Avalos-Diaz E. and Herrera-Esparza R.
Apoptosis and necrosis increase antigenicity of proteins recognized by antinuclear antibodies.,
Reumatismo. 2004; 56(3): 156-161.
14-Cao Q; Xu W; Wen Z; Xu L; Li K; Chu Y. and Xiong S.
An anti-double-stranded DNA monoclonal antibody induced by tumor cell-derived DNA inhibits the growth of tumor in vitro and in vivo via triggering apoptosis,
DNA Cell Biol. 2008; 27(2): 91-100.
|
| |
| |
| |
| المجلد 7 ,
العددان 3-4
, رمضان 1435 - تموز (يوليو) 2014 |
|
|
|
