بحث في أعداد المجلة الجملة   المؤلف

المجلد 7 , العددان 9-10 , ربيع الثاني 1437 - كانون الثاني (يناير) 2016   دور RANTES المصلي في الربو The Role of serum RANTES in Asthma د. فاطمة السليم و أ. د. خليل القوتلي ALSaleem F. and Kwatli Kh. كلية الصيدلة، جامعة دمشق Faculty of Pharmacy, Damascus University الملخص Abstract الربو اضطراب مناعي مزمن في الطرق الهوائية. ويعد RANTES (Regulated upon Activation, Normal T-cell Expressed and Secreted) جاذباً كيميائياً هاماً في الربو. لذا هدفت هذه الدراسة إلى قياس مستويات RANTES المصلية لدى مرضى ربو سوريين. شملت دراستنا 67 مريض ربو (40 مريضاً بحالة الهجمة و27 مريضاً بحالة هدأة) و21 شواهد أصحاء. قيست مستويات RANTES ومستويات IgE الكلي المصلية بطريقة ELISA. كانت مستويات RANTES وقيم IgE الكلي أعلى بشكل يُعتد به لدى مجموعة الهجمة الحادة ](34288.16±16060.15 بكغ/مل) (P<0.05)، (476.46±265.08وحدة دولية/مل) (P<0.05)، على الترتيب[ مقارنة بالأصحاء ](2269.33±1594.49 بكغ/مل)، (55.42±45.03 وحدة دولية/مل)، على الترتيب[ ومرضى الهدأة ](8010.09±7555.86 بكغ/مل)،( 299.74±206.58 وحدة دولية/مل)، على الترتيب[. وكاستنتاج، يلعب الـ RANTES دوراً مهماً في حالات الربو الحادة أكثر منه في الهدأة، وبالتالي له دور في الآليات الالتهابية الربوية، لذا يمكن استخدام قيم RANTES المصلية كواصم في التقييم السريري للربو.   Asthma is chronic inflammatory disorder of the airways. RANTES (Regulated upon Activation, Normal T-cell Expressed and Secreted) is an important chemotaxis in asthma. This study aimed to measure serum RANTES in Syrian asthma patients. Our study included 67 asthma patients (40 acute asthma patients and 27 stable asthma patients) and 21 healthy controls. Serum RANTES and total IgE were assessed by ELISA. Serum levels of RANTES and total IgE were significantly higher in acute asthma patients [(34288.16±16060.15pg/mL) (P<0.05),(476.46±265.08IU/mL) (P<0.05), respectively] compared to healthy controls [(2269.33±1594.49 pg/mL) (55.42±45.03 IU/mL), respectively] and stable asthma [(8010.09±7555.86 pg/mL)(299.74±206.58 IU/mL), respectively]. As conclusion, RANTES has important role in acute asthma more than in stable, subsequently has a role in asthmatic inflammatory mechanisms, so serum RANTES values may be used as a marker in clinical evaluation of asthma.   المقدمة Introduction  الربو اضطراب التهابي مزمن في الطرق الهوائية، تلعب العديد من الخلايا والعناصر الخلوية دوراً هاماً فيه (1). يترافق عادةً هذا الالتهاب مع فرط استجابة الطرق الهوائية (AHR) airway hyper responsiveness مع انسداد منتشر، لكنه متغير في الطرق الهوائية، قابل للعكس تلقائياً أو بالمعالجة (1، 2). وهو يترافق مع فرط إفراز المخاط وهجرة الخلايا الالتهابية وتوسف في الظهارة القصبية وتبدل بنية جدار الطرق الهوائية(3)، حيث تؤدي المكونات الثلاثة (الالتهاب المزمن و AHR والانسداد القابل للعكس) إلى ظهور أعراض الربو المتمثلة بنوبات متكررة من الوزيز wheezing وعسر التنفس breathlessness والضيق في الصدر tightness chest والسعال coughing، خاصةً في الليل أو الصباح الباكر (1، 2)، وتلعب العديد من الوسائط المناعية دوراً هاماً في الربو(4). الكيموكينات هي سيتوكينات صغيرة (8-12KDa)، جرى تصنيفها في أربع مجموعات بالاعتماد على عدد الأحماض الأمينية بين الثمالتين السيستيئنيتين الأوليتين:C ،CC،CXC، CX3C (5)، تلعب الكيموكينات دوراً هاماً في جذب الخلايا الالتهابية من الدوران إلى الطرق التنفسية، حيث يزداد التعبير عن كيموكينات عائلة CC ومستقبلاتها عند مرضى الربو(6). يعد RANTES:Regulated upon Activation, Normal T-cell Expressed and Secreted من الكيموكينات الهامة في الربو القصبي ويجري إنتاجه من قبل خلايا البطانة والأرومة الليفية واللمفاويات (CD4+، CD8+) ومحبات الحمض وباقي الخلايا الالتهابية والصفيحات وبعض أنواع الخلايا الورمية (4، 7، 8، 9)، وهو يلعب دوراً هاماً في العديد من الآليات الالتهابية والمناعية، فهو عبارة عن جاذب كيميائي هام لمحبات الحمض والوحيدات والعدلات واللمفاويات (3، 4، 10) كما أن له أهمية في هجرة الخلايا التائية الذاكرة (7) وهو يؤازر عمل IL5 في تأثيراته على محبات الحمض (5) ويحث على تحرر المفرزات من الخلايا القصبية (4). يتوضع جين RANTESعلى الصبغي 17q11.2-12 وهو يتألف من ثلاثة إكسونات وإنترونين ويلعب تعدد الأشكال في هذا الجين دوراً في فعالية الانتساخ والتعبيرعن هذا البروتين (3)، حيث بينت إحدى الدراسات أن اليابانيين الذين يحملون الأليل −28G يكون لديهم إنتاجاً زائداً للـ RANTES ولديهم استعداد للإصابة بالربو في مرحلة متقدمة من العمر (11)، كما ارتبط تعدد الشكل في المنطقة 28 C /G promoter مع حدوث ربو الأطفال لدى الصينيين (12)، ويرتبط تعدد الشكل في المنطقة 403 G/A promoter مع اختطار وإمكان حدوث هجمات الربو مع شدة انسداد الطرق الهوائية وفرط استجابة القصبات(3). تزداد مستويات RANTES في المفرزات الأنفية لدى مرضى الربو التأتبي عند تعرضهم للمؤرجات (المواد المُحَسِّسَة)، كما تزداد مستوياته في سائل غسيل القصبات لدى هؤلاء المرضى (4). إن حجب RANTESأو مستقبله CCR5 بالأضداد وحيدة النسيلة يؤدي إلى تثبيط الالتهاب في الطرق التنفسية وبالتالي يمكن أن يعد من العلاجات الواعدة للربو (3، 4). المواد والطرق شملت الدراسة 88 فرداً، تراوحت أعمارهم بين 73-18 عاماً، حيث بلغ عدد المرضى 67 مريضاً (21 ذكراً و46 أنثى) من مراجعي قسمي الإسعاف والعيادة الصدرية في مستشفى الأسد الجامعي وفي مستشفى المواساة، جرى تشخيص الربو ومراحله لدى المرضى من قبل أطباء قسم الصدرية في المستشفيات السابق ذكرها وجرى انتقاء المرضى الذين ليس لديهم أية أمراض التهابية أو مناعية ذاتية أو عداوى. وبلغ عدد الأصحاء 21 فرداً (6 ذكور و15 أنثى) جرى التحقق من عدم وجود أية أمراض التهابية أو مناعية لديهم وهم غير مدخنين. جُمعت عينات الدم الوريدي للمرضى والأصحاء، بوضع الدم في أنبوب جاف وبعد تشكل العلقة جرى تنبيذه بسرعة 3000 x g لمدة 10 دقائق بدرجة حرارة الغرفة، ووزع المصل ضمن أنبوبي ايبندورف، ثم حُفظت الأنابيب في درجة حرارة -70ْC إلى حين إجراء المقايسة حسب تعليمات الجهة المصنعة للعتائد. مقايسة مستويات RANTES وقيم IgE الكلي المصلية جرت مقايسة مستويات IgE الكلي المصلية بطريقة المقايسة المناعية الإنزيمية (مبدأ الشطيرة) باستخدام عتيدة Immuoglobulin E (IgE) ELISA المصنعة من قبل شركة DRG الألمانية. وجرى العمل وفقاً لتعليمات المصنع. جرت مقايسة مستويات الـRANTES باستخدام عتيدة Regulated on Activation in Normal T-Cell Expressed and Secreted (RANTES) ELISA المصنعة من قبل شركة Uscn Life Science Inc الصينية، بطريقة المقايسة المناعية الإنزيمية (مبدأ الشطيرة)، وجرى العمل وفقاً لتعليمات المصنع. الدراسة الإحصائية: اُستخدم برنامج SPSS (v:20)، لحساب المتوسط الحسابي والانحراف المعياري واختباري ANOVA وLSD لتحديد كون الفارق بين المتوسطات ناجماً عن المصادفة أو حقيقياً، كما استخدم معامل Pearson لدراسة العلاقة بين المتثابتتين في المجموعة الواحدة وذلك بحدود ثقة P<0.05 كقيمة معتد بها إحصائياً. النتائج Results يبين الجدول 1 نتائج مقايسات الـ RANTES وIgE الكلي، كمتوسط±الانحراف المعياري لأفراد الدراسة جميعهم. وعند المقارنة بين تراكيز IgE الكلي المصلية لدى الأصحاء ومرضى الربو وجد فارق يعتد به إحصائياً بين مرضى الربو بحالة الهدأة والأصحاء (P=0.023) وكذلك وجد فارق يعتد به إحصائياً بين مرضى الربو بحالة الهجمة الحادة والأصحاء (P=0.0001). وكذلك الفارق كان معتداً به (P=0.0001) بالنسبة لقيم IgE الكلي بين مرضى الربو بحالتي الهجمة الحادة والهدأة (الشكل1). جرى التعبير عن القيم بشكل المتوسط±الانحراف المعياري (mean ± standard deviation)، كما كانت قيم RANTES مرتفعة لدى مرضى الربو مقارنة مع الأصحاء، حيث وجد فارق يعتد به إحصائياً بين مرضى الربو بحالة الهجمة والأصحاء (P=0.0001)، وكذلك كان الفارق معتداً به ِ(P=0.0001) بين مرضى الربو بحالتي الهجمة الحادة والهدأة، في حين لم يكن هنالك فارق يُعتد به بين مرضى الربو بحالة الهدأة والأصحاء (P=0.097) (الشكل 2). ولدى دراســة علاقــــة الارتـبـاط بين مســــــــتويات RANTES و IgE الكلي لدى مرضى الربو لوحظ وجود علاقة ارتباط إيجابية معتدٍّ بها (P=0.0001،r=0.460 ) (الشكل 3).   المناقشة Discussion  أظهرت دراستنا ارتفاعاً واضحاً في مستويات RANTES المصلية لدى مرضى الربو بحالة الهجمة الحادة مقارنةً مع المجموعة الشاهدة وبفارق يعتد به إحصائياً. وأيضاً كان هنالك فارق يعتد به إحصائياً بين مرضى الربو بحالة الهدأة ومرضى الربو بحالة الهجمة الحادة. توافقت دراستنا مع دراسة J.Chihara وزملائه في 1996، التي شملت 12 مريض ربو، حيث كان هنالك فارق يعتد به إحصائياً بين مجموعتي الهدأة والهجمة وبين مجموعتي الهجمة والأصحاء، حيث كانت p < 0.05، p< 0.01، على الترتيب. وحسب هذه الدراسة لم يكن هنالك فارق إحصائي هام بين الهدأة والأصحاء (p > 0.1)، وتقترح هذه الدراسة دور RANTES الهام في إمراضية الربو، حيث يجري إفرازه من أكثر من نمط خلوي (13). كما اتفقت دراستنا مع دراسة S.S.Bessa وزملائها في 2012، حيث كان هنالك ارتفاع في مستويات RANTES المصلية لدى مرضى الربو مقارنة مع الأصحاء وبفارق يعتد به إحصائياً. وأيضاً بينت هذه الدراسة وجود علاقة ارتباط بين مستويات RANTES المصلية وIgE الكلي (4). كما بين Z.Zietkowski وزملائه في عام 2008 وجود فارق هام في قيم RANTES بين الأصحاء وبين مرضى الربو، كما وجد فارق يعتد به إحصائياً بين حالتي الهجمة المحرضة بالتمرين وبين مرضى الربو غير المحرض بالتمرين (=P 0.018) (14). وأكدت هذه الدراسة أن تحرر RANTES من الصفيحات المفعلة قد يسبب زيادة التهاب الطرق التنفسية. وتعمل هذه الزيادة في الطرق الهوائية على جذب الخلايا الالتهابية وتحرر المفرزات من الخلايا القصبية، مما يجعل RANTES يلعب دوراً هاماً في التنظيم الصاعد لالتهاب الطرق الهوائية لدى مرضى الربو (14). وبالنسبة لأهمية RANTES فإنه يفسر الآليات الالتهابية والمناعية والإمراضية للربو القصبي، حيث أظهر Stephen T. عام 1997 أن RANTES ينظم هجرة الخلايا الالتهابية في الربو استجابة للتعرض للمؤرج (10)، وبين Oyamada H. عام 2006 أن الوحيدات تساهم في جذب محبات الحمض واللمفاويات التائية إلى مكان الالتهاب من خلال إنتاج RANTES كاستجابة لمؤرج نوعي (15)، كما بين Venge J. عام 1996 أن RANTES وIL5 من الجاذبات الهامة لمحبات الحمض في رئتي مرضى الربو التأتبيين (16). كما بين Halwani R. عام 2011 أن RANTES يحث على فسفرة p42/p44 MAPK وبالتالي يزيد من تكاثر الخلايا العضلية الملساء في الطرق الهوائية، مما يساهم في تعديل بنية الطرق الهوائية (17). وبينKwon O. J. عام 1995 أن RANTES المتحرر من خلايا الظهارة يؤدي إلى جذب محبات الحمض إلى الرئتين في الاضطرابات الرئوية مثل الربو، كما أن إعطاء الكورتيكوستيرويدات له تأثير مفيد من خلال تثبيط التعبير عن RANTES mRNA من قبل الظهارة الرئوية (18).   الاستنتاج  نلاحظ من هذه الدراسة أهمية RANTES في الآلية الإمراضية للربو وخاصةً في الهجمات الحادة، كما يمكن استخدام قيم RANTES المصلية كواصم لتقييم الحالة السريرية لمريض الربو وتقييم الفعالية الالتهابية للطرق التنفسية لدى المريض أثناء الهجمة أو الهدأة، وربط ذلك مستقبلاً بإمكان تطوير أدوية جديدة للربو وذلك من خلال استهداف RANTES أو مستقبله بأضداد نوعية وحيدة النسيلة.  المراجع References  1-Bateman E.D; Hurd S.S; Barnes P.J; Bousquet J; Drazen J.M; FitzGerald M; Gibson P; Ohta K; Byrne P.O; Pedersen S.E; Pizzichini E; Sullivan S.D; Wenzel S.E. and Zar H.J. Global strategy for asthma managementand prevention: GINA executive summary. Eur Respir J; 31(1): 143-178, 2008. 2-Aldington S. and Beasley R. Definition and Diagnosisof Asthma. [ed.] Sebastian L Johnston. ASTHMA an atlas of investigation and management. Oxford: 1-10, 2007. 3-Wen D; Du X; Nie S.P; Dong J.Z.and Ma C.S. Association between RANTES Gene Polymorphisms and Asthma: A Meta-Analysis. Plos One, 9(6), 2014 4-Bessa S.S.E; El-Magd G.H.A and Mabrouk M.M. Serum Chemokines RANTES and Monocyte Chemoattractant Protein-1 in Egyptian Patients with Atopic Asthma: Relationship to Disease Severity. Archives of Medical Research, 43(1): 36-41, 2012. 5-Kips J.C. Cytokines in asthma. Eur Respir J, 18(34): 24–33, 2001. 6-Barnes .P.J. The cytokine network in asthma and chronic obstructive pulmonary disease.J. Clin. Invest. 118(11):3546–3556 ,2008. 7-Crawford A; Angelosanto J.M;Nadwodny K.L; Blackburn S.D.and Wherry E.J. A Role for the Chemokine RANTES in Regulating CD8 T Cell Responses during Chronic Viral Infection. PLoS Pathog, 7(7), 2011. 8-Pods R; Ross D; Hülst S. V; Rudack C. and Maune St. RANTES, eotaxin and eotaxin-2 expression and production in patients with aspirin triad. EAACI, 58 (11):1165–1170, 2003. 9- Aldinucci D. and Colombatti A. The Inflammatory Chemokine CCL5 and Cancer Progression. Mediators Inflamm, 2014 10-Stephen T; Holgate, Kathleen S; Bodey, Janezic A; Anthony J; Frew, Allen P. Kaplan, and Luis M. Release of RANTES, MIP-1 α and MCP-1 into Asthmatic Airways Following Endobronchial Allergen Challenge. AJRCCM, 156(5): 1377-1383, 1997. 11-Hizawa N; Yamaguchi E; Konno s;Tanino y; Jinushi E. and Nishimura M. A Functional Polymorphism in the RANTES Gene Promoter Is Associated with the Development of Late-Onset Asthma. RCCM, 166(5): 686-690, 2002. 12-Liu Q; Hua L; Fang D; Lin Q; Zhu Y; Gan X. andBao Y. Interleukin-13 and RANTES polymorphisms in relation to asthma in children of Chinese Han nationality. Allergy Immunol, 31(3):247-252, 2013. 13-Chihara J; Yasuba H; Tsuda A;Urayama O; Saito N; Honda K; Kayaba H; Yamashita T; Kurimoto F. and Yamada H. Elevation of the plasma level of RANTES during asthma attacks. J Allergy Clin Immunol, 100(6): 52-55, 1996. 14-Zietkowski Z; Lukaszyk A.B; Tomasiak M.M;Skiepko R; Mroczko B.and Szmitkowski M. Changes in RANTES and - β Thromboglobulin after Intensive Exercise in Patients with Allergic Asthma. Int Arch Allergy Immunol, 148: 31-40, 2008. 15-Oyamada H; Kamada Y; Saito N; Tsuda A; Urayama O., Yamada H; Hirasawa H; Yamaguchi K; Ueki S.and Chihara J. RANTES production from mononuclear cells in response to the specific allergen in asthma patients. Allergol Int, 55(3): 2006. 16-Venge J; Lampinen M; Håkansson L; Rak S. and Venge P. Identification of IL-5 and RANTES as the major eosinophil chemoattractants in the asthmatic lung. Journal of allergy and clinical immunology, 97(5): 1110-1115, 1996. 17-Halwani R; Al-Abri J; Beland M; Al-Jahdali H; Halayko A.J; Lee T.H; Al-Muhsen S. and Hamid Q. CC Chemokines Induce Airway Smooth Muscle Proliferation and Survival. The Journal of Immunology, 186 (7): 4156-4163, 2011. 18-Kwon O.J; Jose P.J; Robbins R.A; Schall T.J; Williams T.J. and Barnes P.J. Glucocorticoid inhibition of RANTES expression in human lung epithelial cells. Ajrcmb,12( 5): 488-496, 1995.     المجلد 7 , العددان 9-10 , ربيع الثاني 1437 - كانون الثاني (يناير) 2016 SCLA