بحث في أعداد المجلة الجملة   المؤلف

المجلد 8 , العددان 1 و 2 , رمضان 1437 - تموز (يوليو) 2016   مستويات Survivin المصلية وعلاقتها مع المعالجة الكيميائية لدى مريضات سرطان ثدي سوريات Serum Survivin levels and Their Relationship to Chemotherapy In Syrian Breast Cancer Patients د. نورا برهوم وأ. د. جمانة الصالح Barhoum N. and Al-Salh J. كلية الصيدلة، جامعة دمشق Faculty of Pharmacy, Damascus University الملخص Abstract السورفيفين Survivin هو أحد أعضاء عائلة مثبطات بروتينات الاستماتة. تشمل وظائفه الأولية تثبيط الاستماتة وتنظيم الانقسام الفتيلي، والتي ترتبط مع التَّسَرْطُن. يُعبّر عن الـ survivin بشكل مفرط في طيف واسع من الأورام بما فيها سرطان الثدي. هدفت دراستنا إلى استقصاء المستويات المصلية للـ Survivin لدى مريضات سرطان ثدي وعلاقتها بالمعالجة. شملت الدراسة 62 سيدة: 41 مريضة سرطان ثدي و21 امرأة صحيحة (شواهد). جُمعت العينات المصلية من المريضات عند القبول الأول، قبل المعالجة الكيميائية، وبعد دورتين من المعالجة. جرى تعيين مستويات survivin المصلية بطريقة مقايسة الممتز المناعي المرتبط بالإنزيم (ELISA). أظهرت النتائج أنه لا يوجد فرق يُعتد به في مستويات survivin المصلية بين المريضات والشواهد الأصحاء (p=0.38). ووجدنا أن متوسط المستويات المصلية للـ Survivin كان أقل بعد المعالجة الكيميائية، من متوسط مستوياته قبل المعالجة، لكن لم يصل إلى الاعتدادالإحصائي (p=0.18). وبالتالي تقترح هذه الدراسة عدم إمكان استخدام مستويات الـ Survivin المصلية كواصم ورمي لدى مريضات سرطان ثدي.   Survivin is a member of the inhibitor of apoptosis proteins (IAPs) family. Its primary functions comprise inhibiting apoptosis and regulating mitosis, which are associated with carcinogenesis. It is over expressed in a wide spectrum of tumors including breast cancer. Our study aimed to investigate the serum levels of survivin in patients with breast cancer and their relationship with therapy. The study included 62 women's: 41 patients with breast cancer and 21 healthy Woman (controls). Serum samples were collected on the first admission, before treatment and after two cycles of chemotherapy. Serum survivin levels were determined by enzyme-linked immuno-sorbent assay (ELISA). The results showed that there was no significant difference in the serum levels between patients and healthy controls (P=0.38). We found that mean serum levels of survivin was lower after chemotherapy than mean serum levels before therapy, but did not reach statistical significance (p=0.18). Consequently, this study suggests that serum survivin levels cannot be used as a tumor marker in breast cancer patients.   المقدمة Introduction  يعد سرطان الثدي مشكلة صحية هامة على مستوى العالم، فهو من أكثر السرطانات شيوعاً لدى النساء، كما أنه السبب الرئيسي للوفيات المرتبطة بالسرطان cancer-related deaths (1). وفي سورية يعد سرطان الثدي السرطان الأكثر انتشاراً لدى النساء (2). ويعود ذلك إلى الميل المرتفع لتشكيل النقائل في مرحلة مبكرة وإلى المقاومة المكتسبة لمجال واسع من العوامل المضادة للسرطان، حيث يصبح مرضاً عضالاً عندما ينتشر خارج حدود الثدي والعقد اللمفية المحيطية الموضعية. وفي بعض الحالات تعد المعالجة الكيميائية والمعالجة الإشعاعية هي المعالجة الأساسية في سرطان الثدي ولكنها تترافق مع العديد من الآثار الجانبية. تؤكد هذه الحقيقة أهمية الواصمات الإنذارية والتشخيصية الحساسة الانتقائية في المرحلة المبكرة وأهمية المعالجة الهدفية الأكثر فعالية لهذا المرض (3). يرتبط تطور سرطان الثدي بخلل في التوازن بين تكاثر الخلية والاستماتة. وتتضمن الاستماتة تكاثف النواة والكروماتين المتبع بانكماش الخلية ومظهر الفقاعات الهيولية. وتستطيع الخلايا الورمية أن تكتسب مقاومة للاستماتة من خلال التعبير عن بروتينات معينة مضادة للاستماتة تدعى مثبطات بروتينات الاستماتة (IAPs)inhibitors of apoptosis proteins. تثبط هذه البروتينات الاستماتة من خلال تثبيط شلال الـ Caspase وأيضاً من خلال تنظيم السبيل الداخلي والخارجي للاستماتة (4). السورفيفين Survivin هو بروتين حامضي جَوَّاني intracellular (داخل الخلايا)، يزن 16.5 كيلودالتون، ويتألف من 142 حمضاً أمينياً. اكتشف الـ survivin عام 1997 من قبل Ambrosini وزملائه. وهو العضو الأصغر في عائلة مثبطات بروتينات الاستماتة، ويدعى أيضاً (IAP4)، يُرمَز من خلال جين وحيدة BIRC5 على الصبغي 17 (5). يحتوي survivin على مجال بروتيني BIR وحيد (Baculoviral IAP Repeats)، والذي يكون مشترك مع أعضاء مثبطات بروتينات الاستماتة الأخرى مثل XIAP, c-IAPI, c-IAP2, Livin. ويسهم هذا المجال domain في تثبيط الاستماتة. ولكن يحتوي survivin على extended carboxyl-terminal alpha-helical coiled-coil، بدلاً من carboxyl terminal RING finger، ويعتقد أنها مهمة لتآثره مع الأنيبيبات microtubules وبالتالي لأدواره في انقسام الخلية، حيث يلعب الـ survivin دوراً حيوياً في تحديد بقيا الخلية من خلال وظائفه في انقسام الخلية وتثبيط الاستماتة معاً (6). وجدت دراسات نسيجية عديدة أن survivin، بخلاف مثبطات بروتينات الاستماتة الأخرى، يُعبَر عنه بشكل بارز في الأكثرية الضخمة من الأورام ولا يُعبَر عنه في النسيج الطبيعي المتمايز، حيث ظهرت زيادة في التعبير عن الـ Survivin في سرطان الرئة والثدي وسرطان البروستاتة والمعدة والقولون والمثانة والسرطانة المريئية والساركومة العظمية واللمفوما (7). وجرى الربط بين التعبير عن الـ Survivin وبين الإنذار غير المفضل ونقص الاستجابة للمعالجة الكيميائية في الأنسجة الورمية العديدة (8). كما أظهرت دراسات عديدة في سرطان الثدي أن بعض الأدوية المانعة للسرطان ربما تعمل من خلال تثبيط التعبير عن الـ Survivin (3). تهدف هذه الدراسة إلى استقصاء مستويات Survivin المصلية قبل المعالجة الكيميائية وبعدها لدى مريضات سرطان ثدي سوريات.   المواد والطرق Materials and Methods  جرت المصادقة على البحث من قبل لجنة أخلاقيات البحث العلمي في جامعة دمشق. وملئت الموافقة المستنيرة من كل المشاركات في البحث. مجموعات الدراسة تضمنت الدراسة 62 سيدة، تراوحت أعمارهن بين 27-83 عاماً، جرى توزيعهن ضمن مجموعتين: 1- مجموعة مريضات سرطان الثدي وشملت 41 مريضة، تراوحت أعمارهن بين 27-83 عاماً، مشخص لديهن سرطان ثدي، استناداً إلى نتائج التشريح المرضي والتصوير الشعاعي. 2- المجموعة الشاهدة وشملت 21 سيدة، تراوحت أعمارهن بين 39- 70 عاماً. جرى العمل في مستشفى البيروني الجامعي وذلك على مرحلتين: المرحلة الأولى: امتدت بين 1/12/2013 إلى 15/3/2014. جُمعت العينات المصلية من مريضات سرطان الثدي وذلك قبل البدء بالمعالجة الكيميائية. المرحلة الثانية: امتدت بين 15/3/2014 إلى 26/5/2014. جُمعت العينات المصلية من المريضات بعد دورتين من المعالجة الكيميائية، حيث خضعت المريضات للمعالجة الكيميائية المعتمدة على Anthracycline. جُمع 5 مل من الدم ضمن أنبوب جاف من عيادة سرطان الثدي في مستشفى البيروني. نُبذت العينات بسرعة 1200xg لمدة 10 دقائق، ثم وزِّع المصل الناتج على 4 أنابيب إيبندورف وحفظ بدرجة حرارة -20ºC إلى حين إجراء المقايسة. مقايسة مستويات Survivin المصلية جرى تعيين مستويات survivin المصلية بطريقة الممتز المناعي المرتبط بالإنزيم Enzyme Linked Immuno sorbent Assay (ELISA) باستخدام عتيدةHuman (surv) ELISA) ) لشركة Sun Redالصينية، وجرت المعايرة حسب تعليمات الشركة المصنعة. التحليل الإحصائي Statistical Analysis أجري التحليل الإحصائي باستخدام برنامج الحزمة الإحصائية SPSS (IBM SPSS, version 20). وجرى التعبير عن مستويات survivin المصلية باستخدام المتوسط الحسابي ± الانحراف المعياري، كما جرت المقارنة بين مجموعات الدراسة باستخدام اختبار T-test، لمعرفة فيما إذا كان الفارق بين المجموعات معتداُ به أم أنه ناتج عن الصدفة. واعتمدت القيمة P<0.05 كونها تدل الاعتداد الإحصائي.   النتائج Results  مستويات Survivin المصلية لدى مجموعة مريضات سرطان الثدي والمجموعة الشاهدة. لم يكن هنالك فارق يعتد به إحصائياً في مستويات الـ survivin المصلية بين مجموعة مريضات سرطان الثدي والمجموعة الشاهدة، حيث كانت P=0.38 (الجدول 1). ونلاحظ من الجدول 1 أن قيمة P = 0.38 عند تطبيق اختبار T-test للمقارنة بين المتوسطات وبالتالي نستطيع القول أنه لا يوجد فارق يعتد به إحصائياً في مستويات الـ survivin المصلية بين مجموعة مريضات سرطان الثدي والمجموعة الشاهدة. وكذلك مستويات survivin المصلية لدى مجموعة المريضات قبل المعالجة الكيميائية وبعدها. ويبين الشكل 1 تراكيز Survivin في مصل مريضات سرطان الثدي قبل المعالجة الكيميائية وبعدها، كان متوسط مستويات الـ survivin المصلية لدى المريضات بعد المعالجة الكيميائية (52.73±110.29) أقل من متوسط مستويات survivin المصلية قبل المعالجة الكيميائية (39.91±120.14) ولكن بدرجة لا يعتد بها إحصائياً، حيث كانت p= 0.18 (الجدول 2). نلاحظ من الجدول 2 أن قيمة p=0.18 عند تطبيق اختبار T-test للمقارنة بين المتوسطات، أي لا يوجد فارق يُعتد به إحصائياً في مستويات الـ survivin المصلية قبل المعالجة الكيميائية وبعدها.   المناقشة Discussion   إن هذه الدراسة من الدراسات القليلة التي قاست مستويات survivin في مصل مريضات سرطان الثدي باستخدام الأضداد وحيدة النسيلة، حيث أن غالبية الدراسات السابقة للاستماتة قيمت التعبير عن survivin إما في النسيج المتجمد forzen tissue أو في المواد المنطمرة بالبرافين paraffin-embedded materials. لذلك جرت مقارنة نتائجنا مع النتائج التي تم الحصول عليها من تلك الدراسات، حيث استخدمت هذه الدراسات طرق مختلفة مثل IHC وRT-PCR في الكشف عن الـ .survivin أما في هذه الدراسة فلقد اعتمدنا على تعيين مستويات الـ survivin في المصل بواسطة ELISA، لما لهذه الطريقة من مميزات كونها غير باضعة وسهلة التطبيق، كما أن الدم يجمع من المرضى بشكل روتيني قبل تلقي المعالجة الكيميائية، بالمقارنة مع الطرق التي تتطلب عينات نسيجية بجـودة عالية والتي ربما تكون غير متاحة. بينت دراستنا أنه لا يوجد فارق يعتد به إحصائياً في مستويات الـ survivin المصلية بين المريضات والمجموعة الشاهدة. وهذا يتفق مع نتائج دراسة Guney وزملائه عام 2006 (9). ويتفق أيضاً مع الدراسات التي قاست مستويات الـ survivin المصلية لدى مرضى سرطانات أخرى (8، 10) وأيضاً مع نتائج دراسة Goksel وزملائه عام 2007 (11)، التي استخدمت ELISA لتعيين مستويات الـ survivin المصلية لدى مرضى سرطان الثدي في المرحلة المبكرة. في حين وجدت الدراسات الأخرى والتي استخدمت المزارع النسيجية أن الـ survivin يُعبَر عنه بشكل مفرط لدى مريضات سرطان الثدي ولا يُعبَر عنه في الأنسجة السليمة (12، 13). وقد يُفسَر هذا الاختلاف في نتائجنا عن معطيات الأدب الطبي باختلاف المادة التي حُدد فيها الـ survivin، حيث جرى في هذه الدراسة قياس مستويات الـ survivin في المصل، بينما في الدراسات الأخرى جرى قياس التعبير عن الـ survivin في الأنسجة الورمية . أيضاً، قد يُفسَر هذا الاختلاف بالتقنيات المختلفة التي استخدمت لتقييم التعبير عن الـ survivin. وبالتالي لا يمكن استخدام مستويات الـ survivin المصلية كطريقة بديلة، سهلة وسريعة، عن تحليل التعبير عن survivin في الأنسجة الورمية. ووجد أيضاً في هذه الدراسة أنه ليس هنالك فارق يعتد به إحصائياً في مستويات الـ survivin المصلية قبل وبعد دورتين من المعالجة الكيميائية. وهذا يتفق مع دراسة Gueny وزملائه عام 2006 (9). وربما تفسر هذه النتيجة بفترة المتابعة القصيرة للمريضات (42 يوماً)، أو بسبب انحلال الخلايا الورمية الجائلة وتحرر الـ survivin منها، أو ربما باستدامة الخلايا الورمية المتبقية.   الاستنتاج Conclusion  وجدنا في هذه الدراسة أنه لا يمكن استخدام مستويات الـ survivinالمصلية كواصم ورمي لدى مريضات سرطان ثدي.  المراجع References:  1-IARC: international Agency For Research on cancer: World Cancer Report 2012, Breast Cancer Estimated Incidence, Mortality and Prevalence Worldwide in 2012: IARC. 2-World Health Organization, Towards a strategy for cancer prevention and control in Eastern Mediterranean Region, Document. WHO-EM/NCD/060/E/7.09/400,2009. 3-Lv Y.G; Yu F; Yao Q; Chen J.H. and Wang L. The role of survivin in diagnosis ,prognosis and treatment of breast cancer. J Thorac Dis, 2(2):100-110, 2010. 4-Jha K; Shukla M. and Pandey M. Survivin expression and targeting in breast cancer. Surgical Oncology, 21: 125-131, 2012. 5-Ambrosini G; Adida C. and Altieri A. A novel anti-apoptosis gene, survivin, expressed in cancer and lymphoma. Nat Med, 3(8): 917-921, 1997. 6-Yamamoto H; Ngan C. and Monden M. Cancer cells survive with survivin. Cancer Sci, 99(9): 1709-1714, 2008. 7-Hei C; Cheung A; Huang C.C; Tsai F.Y; Lee Y.C; Cheng S.M; Chang Y.C; Huang Y.C; Chen S.H. and Chang J.Y. Survivin-biology and potential as a therapeutic target in oncology. Onco Targets Ther, 6: 1453-1462, 2013. 8-Derin D; Soydinc H.O; Guney N; Tas F; Camlica H; Duranyildiz D; Yasasever V. and Topuz E. Serum levels of apoptosis biomarkers, survivin and TNF-alpha in nonsmall cell lung cancer. Lung Cancer, 59: 240-245, 2008. 9-Guney N; Soydine H.O; Derin D; Tas F; Camlica H; Duranyildiz D; Yasasever V. and Topuz E. Serum and urine survivin levels in breast cancer. Med Oncol, 23: 335-339, 2006. 10-Fawzy A; Gaafar R; Kasem F; Ali SS; Elshafei M. and Eldeib M. Importance of serum levels of angiopoietin-2 and survivin biomarkers in non small cell lung cancer. Journal of the Egyptian National Cancer Institute, 24: 41-45, 2012. 11-Goksel G; Taneli F; Uslu R; Ulman C; Dinc G; Coskun T. and Kandiloglu AR. Serum Her-2/ neu and survivin levels and their relationship to histological parameters in early –stage breast cancer. J Int Med Res, 23: 165-172, 2007. 12-Kennedy SM; O’Driscoll L; Purcell R; Fitz-Simons N; McDermott EW. and Hill AD. Prognostic importance of survivin in breast cancer. Br J Cancer, 88(7): 1077-1083, 2003. 13-Tanaka K; Iwamoto S; Gon G; Nohara T; Iwamoto M. and Tanigawa N. Expression of survivin and its relationship to loss of apoptosis in breast carcinomas. Clin Cancer Res,6(1):127–134,2000.     المجلد 8 , العددان 1 و 2 , رمضان 1437 - تموز (يوليو) 2016 SCLA