بحث في أعداد المجلة
الجملة  
المؤلف   
 

المجلد 8 , العددان 1 و 2 , رمضان 1437 - تموز (يوليو) 2016
 
تصنيف العصيات اللبنية ذات القدرة الالتصاقية المعزولة من النبيت الفموي لأفراد سوريين
Classification of Adherent Lactobacillus Isolated from Oral Flora of Syrian Individuals
د. نوال داود و أ. د. خليل القوتلي وأ. د. مصطفى العموري
Daoud N; AL Khouatli Kh. and AL Amouri M.
كلية الصيدلة، جامعة دمشق
Faculty of Pharmacy, Damascus University
الملخص Abstract
تشكل العصيات اللبنيةLactobacillus جزءاً هاماً من النَّبيتُ الجُرْثومِيُّ الفَمَوِيّ. وعندما تلتصق العصيات اللبنية على الأسنان، فإنها تقوم بتخمير السكاكر معطية بيئة حمضية تؤدي إلى إزالة تمعدن الأسنان وتشكيل الفِلْم الحيوي الجرثومي من قبل الجراثيم الأخرى، خاصة العقديات الطافرة Streptococcus mutans. لكن الدراسات الحديثة أثبتت أن العصيات اللبنية يمكن أن تقدم دوراً مفيداً في صحة الفم لأنها دواعم حيوية Probiotics. لذلك هدفنا في هذه الدراسة إلى عزل العصيات اللبنية من النَّبيتُ الجُرْثومِيُّ الفَمَوِيّ لأفراد سوريين واستعراف الذراري ذات القدرة الالتصاقية. وشملت دراستنا94 عينة لعاب، عزلت منها الجراثيم بالزرع على مستنبت مُغنّى لاستنبات العصيات اللبنية المرهفة (وسط MRS). وجرى التأكد من صفات الجراثيم المنتمية لجنس Lactobacillus بدراستها حسب الطرق المرجعية. وبالنتيجة حصلنا على 42 ذرية من العصيات اللبنية من 34 عينة (34 من 94 عينة أي بنسبة مئوية 36.17%). جرى بعد ذلك استعراف الذراري ذات القدرة الالتصاقية (20 ذرية) بواسطة شرائط التصنيف الجرثومي API50 CHL، فأظهرت النتائج 8 ذرارٍ من النوع L. Fermentum 1 و4 ذرارٍ من النوع L. Salivarius و3 ذرارٍ من النوع L. Pentosus وذريتين من النوع L. Fermentum 2 و ذريتين من النوع L. Delbrueckii وذرية من النوع L. Rhamnosus، حيث تلعب هذه الذراري المعزولة ذات القدرة الالتصاقية دوراً هاماً كداعم حيوي أو مُسَوِّس (يسبب تسوس الأسنان). 
Lactobacillus is an important part of the oral flora. When lactobacillus adheres on the teeth, it ferments sugars producing acidic environment, this environment leads to demineralization of the teeth and formation of bacterial biofilm by other bacteria, especially Streptococcus mutans. Recent studies have proved that lactobacillus could also play a beneficial role in oral health, because they are probiotics. So we aimed in this study to isolate lactobacillus from oral flora of Syrian individuals and identify the adherent strains. A total of 94 saliva samples were involved in this study, bacteria were isolated using an enriched culture medium for cultivation fastidious Lactobacillus (MRS culture). Verifying of bacteria that belong to Lactobacillus genus was done by studying specifications according to reference methods. As a result, we isolated 42 strains of Lactobacillus from 34 samples (34\94, 36.17%). Identification of the strains which have adherence capacity (20 strains) was done by bacterial identification strips API50 CHL, results showed 8 strains of L. Fermentum 1, 4 strains of L. Salivarius, 3 strains of L. Pentosus, 2 strains of L. Fermentum2, 2 strains of L. Delbrueckii and 1 strain of L. Rhamnosus. These isolated adherent strains play an important role as probiotic or cariogenic.  
المقدمة Introduction 
تعد النخور السنية من أكثر الأمراض انتشاراً، فنسبة الإصابة بها حسب إحصائيات منظمة الصحة العالمية عالية جداً، إذ تتراوح بين 60 - 90% لدى أطفال المدارس (12)، وتبلغ في سورية حوالي %75لدى الأطفال في عمر 5 أعوام، وتنخفض هذه النسبة قليلاً لدى الأكبر سناً ثم تعود وتزداد بشكل كبير لدى البالغين خاصة بعد عمر 35 عاماً (2).
تلعب العصيات اللبنية الملتصقة على الأسنان دوراً هاماً في تطور النخر السني وازدياد تشكيل الغطاء الحيوي الجرثومي الذي بدأت به الجراثيم الأخرى وخاصة العقدية الطافرة Streptococcus mutans والعقدية الهيّنة Streptococcus mitis والعقدية اللعابية Streptococcus salivarius بالإضافة إلى المعوية البرازية Enterococcus faecalis والشعيّة Actinomyces (11)، كما تساهم بازدياد تسوس الأسنان لأنها تنتج حمض اللبن الذي يسبب انخفاض pH الوسط، مما يؤدي إلى انحلال فسفات الكالسيوم وهو المكون الرئيسي لطبقة الهيدروكسي أباتايت hydroxyapatite التي تغطي الأسنان (9، 18).
ومن جهة أخرى فقد أثبتت الدراسات الحديثة دور العصيات اللبنية المفيد لصحة الإنسان كداعم حيوي probiotic (24)، وهي جراثيم حية تقدم فائدة صحية للمضيف عندما تتواجد بكميات مناسبة (7)، إذ أنها تسهم في العلاج والوقاية من العديد من أمراض الجهاز الهضمي (15، 25)، وكذلك في التعديل المناعي للأمراض الالتهابية المناعية المتعلقة بالجهاز البولي التناسلي والجهاز التنفسي والحساسية الجلدية (25، 14)، بالإضافة إلى دورها في الوقاية من السرطان (1). ولكي تقوم العصيات اللبنية بدورها كدواعم حيوية probiotics يجب أن تكون قادرة على الالتصاق والاستعمار لتشكل النبيت الجرثومي flora الطبيعي المتوازن (16).
تُصنف العصيات اللبنية ضمن الجراثيم المنتجة لحمض اللبن Lactic Acid Bacteria (LAB) التي تعرف بأنها الجراثيم القادرة على اعطاء حمض اللبن كمنتج نهائي لاستقلاب السكريات (17). وهي جراثيم إيجابية الغرام، هوائية أو لاهوائية مخيرة facultative anaerobic، تأخذ شكل العصيات أو المكورات أو العصورات coccobacilli (5، 6)، غير مبوغة وغير متحركة، سلبية الكاتلاز والأكسيداز. وتندرج ضمن جنس Lactobacillus أنواع عديدة جداً يصعب التمييز بينها، حيث صنفت في دليل Bergey's Manual of determinative bacteriology تصنيفاً معقداً حسب تخميرها للسكاكر ودرجة الحرارة المثلى لنموها (17). ومن الطرق الحالية المستخدمة لتصنيف الأنواع، الاختبارات الكيميائية الحيوية التي تعتمد على نظام تخمير السكاكر، حيث تُستخدم شرائط API 50 CHL strips التي تضم 50 اختباراً لتخمير السكاكر، بالإضافة إلى طرق البيولوجيا الجزيئية (19). لذلك توجهنا في هذا البحث إلى عزل ذرارٍ عديدة من العصيات اللبنية من لعاب أطفال أصحاء فموياً لمعرفة الأنواع الأكثر انتشاراً في النبيت الجرثومي الفموي وتصنيف الذراري الملتصقة منها التي تلعب الدور الأكبر إما بالدعم الحيوي (probiotic) أو بتطور النخر السني.  
المواد والطرق Materials and Methods 
المواد والأجهزة المستخدمة
وسط MRS ( (Man,Rogosa and sharpوهو وسط غير انتقائي لكنه مستنبت مُغنّى enriched culture medium يستعمل عالمياً لعزل العصيات اللبنية (HiMedia, India)، شرائط تصنيف العصيات اللبنية API50 CHL (Biomerieux, France)، عتيدة تلوين غرام (Abtek, UK)، عتيدة تلوين الأبواغ (أخضر المالاشيت Abtek, UK)، ماء أكسجيني %15، صفائح microtiter plate ذات قعر مستدير مكونة من 96 بئراً وصفائح مشابهة ذات قعر مسطح (Genederix, Taiwan)، محلول البنفسجية المتبلورة 0.1%، الإيثانول الطبي 95%، قارئ الصفائح (Elisys Uno Human,UK)

العينات Samples
شملت الدراسة 94 عينة لعاب تم جمعها من أطفال سليمين فموياً ليس لديهم نخور سنية وأخذت صباحاً على الريق، حيث جرى استبعاد الذين يعانون من التهاب اللثة أوالتقرحات الفموية والذين يستعملون مضادات حيوية جهازية أومطهرات فموية.

طريقة عزل العصيات اللبنية

وضعت عينة اللعاب المأخوذة مباشرة بأنبوب مرق وسط MRS وحضنت بالدرجة C37 بوجود جو محيط من CO2 بنسبة %10-5 لمدة 24 ساعة، ثم زرعت العينات السابقة على وسط غراء MRS بطريقة التثليم streeking وحضنت بالدرجة C37 بوجود جو محيط من CO2 بنسبة %10-5 لمدة 24-48 ساعة. جرى بعد ذلك انتقاء العينات التي ظهرعليها مستعمرات نامية ليتم استكمال العمل عليها.

الاختبارات المرجعية المطبقة لتحديد الجراثيم المنتمية لجنس Lactobacillus

تلوين غرام: طبق على المستعمرات النامية لتحديد نوعها، وعند فحصها تحت المجهر بالعدسة الغاطسة ظهر بعضها بشكل مكورات أو فطور بينما ظهر الجزء الآخر بشكل عصيات أو عصورات إيجابية غرام، وجرى التأكد من أن هذه العصيات هي عصيات لبنية من خلال إجراء بقية الاختبارات التأكيدية التالية:
اختبار الكاتالاز: العصيات اللبنية سلبية الكاتالاز، فلا تظهر فقاعات عند إضافة الماء الأكسجيني إليها.

تلويـن الأبواغ: استخدم ملون أخضر المالاشيت
وفق الطريقة التالية: تُؤخذ مستعمرة معزولة وتعلق بالمصل الفيزيولوجي وتفرش على الصفيحة وتترك لتجف، ثم تثبت على اللهب، بعدها تغمر بمحلول صبغة المالاشيت وتسخن فوق حمام مائي حتى بدء تصاعد البخار لمدة 5 دقائق مع إضافة الصبغة عند اللزوم، ثم تغسل الصفيحة بتيار مائي خفيف حتى زوال اللون الأخضر، بعد ذلك تغمر بمحلول السفرانين لمدة دقيقة أو دقيقة ونصف ويغسل المحضر بالماء جيداً لمدة 30 ثانية وعند جفافه يفحص تحت المجهر بالعدسة الغاطسة، حيث يجب أن تتلون الأبواغ باللون الأخضر المزرق والخلايا باللون الأحمر، أما بالنسبة للعصيات اللبنية فهي لا تشكل أبواغاً لذلك لا نرى أي لون أخضر وتشاهد فقط الخلايا بلون أحمر.
اختبار الحركة: تُؤخذ مستعمرة جرثومية وتزرع في وسط نصف صلب بواسطة عروة loop ذات نهاية مستقيمة، ثم يحضن الأنبوب بالدرجة C37 بوجود جو محيط من CO2 بنسبة %10-5 لمدة 24-48 ساعة، فنلاحظ النمو الجرثومي عند خط الزرع فقط لأن العصيات اللبنية غير متحركة.

طريقة حفظ العصيات اللبنية
بعد التأكد من أن المستعمرات النامية هي عصيات لبنية تؤخذ مستعمرة مفردة وتزرع على طبق MRS آغار بهدف تكثيرها وتحضن بالدرجة C37 بوجود جو محيط من CO2 بنسبة %10-5 لمدة 24-48 ساعة، ثم تحفظ الجراثيم النامية في وسط يحوي %60 مرق MRS و%40 غليسيرول بالبرودة بدرجة -20C أو بالمجمدة (-80C). وعند استخدامها تنشط بزراعتها بداية في مرق MRS.

اختبار القدرة الالتصاقية للعصيات اللبنية حسب طريقة المعايرة المِكروية باستخدام الصفيحة ذات الآبار The microtiter plate assay
حُضِّر معلق جرثومي للذراري المدروسة بتركيز بدئي 0.5 ماكفرلاند (108 CFU\ml) جرى قياسه بمقياس العكر الخاص بسلسلة ماكفرلاند، حيث أُجريت ثلاثة تمديدات عشرية للمعلق (1 ml معلق جرثومي+ 9 ml مصل فيزيولوجي) للحصول على تركيز للمعلق يعادل تقريباً (105–106 CFU\ml)، ثم وضع 100 مكرولتر من المعلق الجرثومي المدد الخاص بكل ذرية في ثلاث آبار، بعدها حُضنت الصفيحة ذات القعر المستدير لمدة 48 ساعة بالدرجة C37 بوجود CO2 (%10-5). بعد إخراج الصفيحة من الحاضنة جرى غسلها ثلاث مرات بالماء مع هزها بشكل خفيف للتخلص من الجراثيم غير الملتصقة. ثم أضفنا 200 مكرولتر من محلول البنفسجية المتبلورة 0.1% إلى كل الآبار لتتلون الجراثيم الملتصقة وتركت الصفيحة لمدة 10 دقائق بدرجة حرارة الغرفة. بعدها غُسلت الصفيحة باستخدام أحواض الماء للتخلص من كمية الملون الزائدة وقُلبت ثم وُضعت على ورقة نشاف لتجف. بعد ذلك جرت إضافة 200 مكرولتر من الإيثانول الطبي 95% لكل الآبار، وتركت مدة 15 دقيقة بدرجة حرارة الغرفة. وفي النهاية أُخذ 125 مكرولتر من المحلول الغولي الموجود في الآبار ووضعت في آبار الصفيحة ذات القعر المسطح بترتيب الصفيحة الأولى نفسه وقيست الكثافة البصرية OD) Optical Density) لمحتوى كل الآبار وذلك بموجة طولها 590 نانومتر بواسطة قارئ الصفائح بوجود الإيثانول الطبي 95% كشاهد.
ملاحظة: بناء على الاختبار السابق جرى انتقاء الذراري الملتصقة (20 ذرية) لاستكمال العمل عليها (مع ملاحظة أن تلك الذراري كانت ملتصقة على آبار صفيحة microtiter plate ذات القعر المسـتدير، بينما قيسـت الكثافة البصرية للمحلـول الكحولي الموجود في الصفيحة ذات القعر المسطح).
تصنيف ذراري العصيات اللبنية بوساطة شرائط التصنيف الجرثومي API50 CHL
بعد التأكد من نقاوة الذرية الجرثومية المعزولة تزرع على MRS آغار وتحضن بالدرجة C37 بوجود CO2 بنسبة %10-5، لمدة 24 ساعة، ثم يُحضر معلق جرثومي في عبوة الوسط المرفق مع الكيت ويتابع العمل حسب تعليمات الشركة الصانعة. بعد ذلك تُدخل النتائج الى الحاسوب لتحديد نوع الذرية عن طريق البرنامج الالكتروني المرفق من قبل الشركة الصانعة.  
النتائج Results 
جرى العمل على 94 عينة لعاب رقمت من 1 حتى 94 حسب تاريخ جمعها بدءً من الأقدم.
أظهرت النتائج نمو مستعمرات على وسط MRS آغار في 67 عينة أي بنسبة مئوية 71.28%. ولقد عزلت العصيات اللبنية من 34 عينة أي بنسبة %36.17 من العينات الكلية، علماً بأن 8 من 34 عينة لوحظ فيها ذريتان من العصيات اللبنية وبالتالي يصبح عدد الذراري المعزولة 42 ذرية من العصيات اللبنية. ويبين الجدول 2 عدد الجراثيم والفطور المعزولة ونسبها.
خضعت 42 ذرية معزولة من العصيات اللبنية لاختبار الالتصاق حسب طريقة المعايرة المِكروية باستخدام الصفيحة ذات الآبارThe microtiter plate assay فحصلنا على 20 ذرية ذات قدرة التصاقية ( قراءة الكثافة البصرية لها أعلى من 0.15 مقارنة بالإيثانول الطبي كشاهد) ثم جرى تصنيفها بوساطة شرائط .API 50 CHL ويبين الجدول 3 أنواع الذراري المعزولة وعددها ونسبتها.
استعرف نوع الذراري السابقة بعد إدخال نتائج تخمير السكاكر إلى الحاسوب، حيث يقوم البرنامج الالكتروني بمقارنة نموذج تخمير السكاكر الخاص بالذرية مع النتائج المرجعية، وبناءً على ذلك حصلنا على الذراري التالية:
8 ذرارٍ من النوع L. Fermentum 1، حيث أعطت 5 ذرارٍ منها نتيجة بنسبة %99.9 (موافقة للنتيجة المرجعية)، بينما كانت نسبة التوافق للذريتين   الباقيتين%89.3 ، حيث أنها تختلف عن سابقاتها بأنها خمرت الأرابينوز الميسر LARA بالبئر رقم 4 والكسيلوز الميمن DXYL بالبئر رقم 6، بينما لم تخمر الميليبيوز الميمن MEL بالبئر رقم 30. أما الذرية الأخيرة فقد أعطت نسبة %82.3، حيث أنها خمرت الكسيلوز الميمن بالبئر رقم 6 والإيسكولين بالبئر رقم 25 بينما لم تخمر الغالاكتوز الميمن GAL بالبئر رقم 10 واللاكتوز الميمن LAC بالبئر رقم 29.
4 ذرارٍ من النوع L. Salivarius، حيث أعطت 3 ذرارٍ منها نسبة مئوية %99.9 موافقة للنتيجة المرجعية بينما كانت النسبة المئوية للذرية الرابعة تساوي %99.7، إذ اختلفت عن الباقي بأنها خمرت الإيسكولين بالبئر رقم 25 بينما لم تخمر الرافينوز الميمن RAF بالبئر رقم 35. 3ذرارٍ من النوع L. Pentosus، حيث أعطت نتيجة بنسبة %99.9 موافقة للنتيجة المرجعية. ذريتين من النوع L. Fermentum 2، حيث أعطت الأولى نسبة مئوية تساوي%99.9 ، بينما أعطت الذرية الأخرى نسبة مئوية تساوي %81.7، إذ اختلفت عن السابقة بأنها خمرت الكزيلوز الميمن DXYL بالبئر رقم 6 والتريهالوز الميمن TRE بالبئر رقم 32. ذريتين من النوعL. Delbrueckii ، حيث أعطت نسبة مئوية تساوي 99.9% موافقة للنتيجة المرجعية. ذرية واحدة من النوع L. Rhamnosus بنسبة مئوية 99.9% موافقة للنتيجة المرجعية.
 
المناقشة Discussion 
يعد اللعاب العامل الرابط بين مختلف الأنسجة والبنى في التجويف الفموي، ويحتوي مختلف أنواع النبيت الجرثومي الفموي، بما فيها العصيات اللبنية، كما يتعلق عدد الجراثيم الملتصقة في الفم والتي تمثل جراثيم النبيت الجرثومي الفموي بنسبة وجودها باللعاب، لذلك تناولت دراستنا اللعاب كعينة لتحري وجود العصيات اللبنية في النبيت الجرثومي الفموي، فكانت النسبة المئوية لوجودها في اللعاب 36.17%. ولقد توافقت هذه النسبة مع دراسة أجريت في السويد من قبل Köhler وزملائه، حيث كانت نسبة تواجدها 40% لدى الأطفال منذ عمر 3 أعوام وكان حجم العينات قريب من حجم عينتنا (77 عينة) ، بينما كانت أقل بقليل بالنسبة لدراسة أخرى أجريت في السويد من قبل Carlsson وزملائه، حيث كانت النسبة 50% لدى الأطفال بعمر السنتين (3). ولقد اختلفت دراستنا عن دراسة أجريت في المكسيك عام 2009 على أطفال بعمر 6-12 عاماً، حيث كانت نسبتها لدى المكسيكيين 76.9% (13)، وقد يعود هذا الاختلاف إلى اختلاف عمر الأطفال الدراسة في الدراستين وإلى اختلاف البيئة ونمط التغذية، حيث أن العصيات اللبنية لا تتواجد في الفم عند الولادة، بل تبدأ بالظهور خلال العام الأول من العمر (3). ويتعلق وجودها بالعديد من العوامل كنوع الإرضاع الذي يتلقاه الوليد (23، 26) ومعدل الكربوهيدرات التي يتناولها الطفل (20)، بينما يتعلق لدى البالغين بالتدخين والأدوية ونمط التغذية (4).

استعرفنا في دراستنا 20 ذرية ملتصقة معزولة من النبيت الجرثومي الفموي وجرى تصنيفها بوساطة شرائط API 50 CHL، فحصلنا على 6 أنواع كان أكثرها L. Fermentum 1 (%40) ثم L. Salivarius (%20) ثم L. Pentosus (%15) ثم L. Fermentum2 وL. Delbrueckii (%10) ثم L. Rhamnosus (%5). ولقد توافقت دراستنا مع دراسة Koll-Klais وزملائه التي أجريت في إيستونيا عام 2004 على أطفال بعمر 12 عاماً والتي وجدت أن النسبة الأكبر للنوع L. Fermentum (%64)، وكذلك بالنسبة للنوع L. Salivarius (%27) وL. Delbrueckii (9%)، لكنها اختلفت عن دراستنا بأن نسبة L. Rhamnosus كانت عالية (%18) وبأنها عزلت ذرارٍ أخرى بنسب عالية L. Plantarum وL. Paracasei (36%) وL. Oris (%45) وL. Acidophilus وL. Gasseri وL. Crispatus (9%) وأيضاً لم تعزل L. Pentosus (10).

وتوافقت دراستنا أيضاً مع دراسةTennpaisan and Dahlen في تايلاند عام 2006 وشملت 77 عينة من ناحية انتشار L. Fermentum بنسبة أعلى من باقي الأنواع (%38)، بينما اختلفت معها بارتفاع نسبة L. Rhamnosus (25%) وانخفاض نسبة L. Salivarius (5%) وبأنهاعزلت ذرارٍ أخرى هي L. Casei وL. Plantarum وL. Acidophilus، بينما لم يجرِ عزل L. Delbrueckii و L. Pentosus (22).

اختلفت دراستنا عن الدراسة التي أجريت في المكسيك عام 2009، حيث كانت الذراري المعزولة L. Acidophilus (%67) وL. Parecasei (13%) وL. Plantarium (11%) وL. Brevies (9%)، وقد استخدمت هذه الدراسةAPI50CHL إلى جانب الطرق الجزيئية بالتصنيف (13).

وعند المقارنة مع الدراسة التي أجراها J. Samot وزملاؤه في فرنسا عام 2011 على 70 ذرية، حيث عزلت الذراري من اللعاب بهدف دراسة التصاقها تبين أنها توافقت مع دراستنا بظهور ذرارٍ ملتصقة هي L. Fermentum و L. Rhamnosus، بينما لم تتوافق بظهور L. Delbrueckii، L. Salivarius و L. Pentosus، بل ظهرت ذرارٍ ملتصقة أخرى هي L. Brevis و L. Plantarum و L. Paracasei و L. Gasseri و L. Casei و L. Buchneri (18).

وتعود هذه الاختلافات إلى اختلاف المنطقة الجغرافية والعوامل البيئية التي تلعب دوراً كبيراً في اختلاف النبيت الجرثومي وأيضاً إلى اختلاف نوع الإرضاع (8، 21) ونوع الطعام ومحتواه من السكاكر (4، 20) الذي يؤثر على وجود العصيات اللبنية بالفم، وإلى الاختلاف في حجم العينات، مع ملاحظة ظهورL. Plantarium في معظم الدراسات بينما في دراستنا ظهرت L. Pentosis وهي تشبه L. Plantarium في كثير من صفاتها وتصنف أحياناً L. Paraplantarium.  
الاستنتاجات

عُزلت 42 ذرية من العصيات اللبنية من النبيت الجرثومي الفموي لأصحاء فموياً، ثم صُنفت الأنواع الملتصقة من الذراري المعزولة وهي L. Fermentum1، L. Salivarius،L. Delbrueckii، L. Pentosus،L. Fermentum2، L. Rhamnosus. وننصح باستكمال الدراسات على هذه الأنواع الملتصقة كخطوة نحو استخدامها في المستقبل في الدعم الحيوي probiotic أو توضيح دورها بالنخور السنية.  
المراجع References 
1-Ambalam P; Raman M; Purama RK. and Doble M.
Probiotics, prebiotics and colorectal cancer prevention.
Best Pract Res Clin Gastroenterol, 30(1): 119-131, 2016.

2-Beiruti N.
Oral health in Syria.
International Dental Journal, 54: 383-388, 2004.

3-Badet C. and Thebaud N.B.
Ecology of Lactobacilli in the Oral Cavity: A Review of Literature.
Open Microbiol J. 2: 38-48.2008.

4-Conlon A.M. and Bird R.A.
The Impact of Diet and Lifestyle on Gut Microbiota and Human Health.
Nutrients, 7(1): 17-44, 2015.

5-DelMaza M.L; Pezzlo T.M. and Baron J.E.
Aerobic Gram Positive Bacilli And Actinomyces spp; in “Color Atlas Of Diagnostic Microbiology”, Ed. Dela Maza M.L; Pezzlo T.M. and Baron J.E.
Pub. Mobsy, 49-55, 1997.

6-Forbes A.B; Sahm F.D. and Weissfeld S.A.
Erysipelothrix, Lactobacillus and similar organism, in “Diagnostic Microbiology 12th ed”
Ed. Forbes A.B; Sahm F.D. and Weissfeld S.A.
Pub. Mosby Elsevier, 303-310. 2007.

7-Hill C; Guarner F; Reid G; Gibson R.G; Merenstein J.D; Pot B. Morelli L; Canani B.R; Flint J.H; Salminen S; Calder C.P. and Sanders E.M.
The International Scientific Association for Probiotics and Prebiotics consensus statement on the scope and appropriate use of the term probiotic.
Nat. Rev. Gastroenterol. Hepatol, 11: 506-514, 2014.

8-Holgerson L.F. et al.
Oral Microbial Profile Discriminates Breastfed from Formula-Fed Infants.
J Pediatr Gastroenterol Nutr; 56(2): 127–136, 2013.

9-Karpinski T. and Szkaradkiewicz A.
Microbiology of dental caries.
J Biol Earth Sci, 3(1): 21 -24, 2013.

10-Kõll-Klais P; Mändar R; Leibur E. and Kjaeldgaard M.
High levels of salivary lactobacilli in Estonian schoolchildren.
Eur J Paediatr Dent; 5(2):107-109, 2004.

11-Majumdar S. and Singh AB.
Normal Microbial Flora of OralCavity.
J Adv Med Dent Scie Res, 2(4):62-66, 2014.

12-Media center.
Oral health.
WHO. Fact sheet N318. April 2012.

13-Méndez R.C; Badet C; Yáñez A; Dominguez M.L;Giono S;Richard B, Nancy J and Dorignac G.
Ientification of oral strains of Lactobacillus speciesisolated from Mexican and French children.
Journal of Dentistry and Oral Hygiene, 1(1), 009-016, 2009.

14-Rastogi P; Saini H; Dixit J. and Singhal R.
Probiotics and oral health.
Natl J Maxillofac Surg. 2(1): 6-9, 2011.

15-Reddy S.R; Swapna A.L; Ramesh T; Singh R.T; Vijayalaxmi N. and Lavanya R.
Bacteria in Oral Health – Probiotics and Prebiotics A Review.
Int J Biol Med Res, 2(4): 1226 -1233, 2011.

16-Reid G.
Probiotics: definition, scope and mechanisms of action.
Best Practice & Research Clinical Gastroenterology. 30: 17-25, 2016.

17-Rettger L.F.
Lactobacillus in “Bergey's manual of determinative bacteriology 9th ed” Ed. Bergey D. H. and Holt G.H. Pub.
Lippincott Williams & Wilkins, 349-1050, 2000.

18-Samot J; Lebreton J. and Badet C.
Adherence capacities of oral lactobacilli for potential probiotic purposes.
Anaerobe, 17: 69-72, 2011.

19-Sánchez E. and Sanz Y.
Lactobacillus in “Molecular Detection of Human Bacterial Pathogens”
Ed. Liu D; Pub. CRC Press, 259-267, 2011.

20-Slavin J.
Fiber and Prebiotics: Mechanisms and Health Benefits.
Nutrients, 5(4): 1417-1435, 2013.

21-Solis G; de Los Reyes-Gavilan CG, Fernandez N; Margolles A and Gueimonde M.
Establishment and development of lactic acid bacteria and bifidobacteria microbiota in breast-milk and the infant gut.
Anaerobe, 16: 307-310, 2010.

22-Teanpaisan R. and Dahlén G.
Use of polymerase chain reaction techniques and sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis for differentiation of oral Lactobacillus species, Oral Microbiol.
Immunol. 21(2): 79-83, 2006.

23-Vestman R.N; Timby N; Holgerson L.P; Kressirer A.C; Claesson R, Domellöf M, Öhman C; Tanner CR A. and Hernell O.
Characterization and in vitro properties of oral lactobacilli in breastfed infants.
BMC Microbiology. 13-193. 2013.

24-Vuotto C; Longo F. and Donelli J. Probiotics to counteract biofilm-associated infections: promising and conflicting data.
IJOS, 6:189-194, 2014

25-Vyas U and Ranganathan N.
Probiotics, Prebiotics, and Synbiotics: Gut and Beyond.
Gastroenterology Research and Practice, 2, 2012.

26-Wernersson J; Danielsson Niemi L; Einarson S; Hernell O. and Johansson I.
Effects of human milk on adhesion of Streptococcus mutans to saliva-coated hydroxyapatite in vitro.
Caries Res; 40: 412-417, 2006.  
 
 
المجلد 8 , العددان 1 و 2 , رمضان 1437 - تموز (يوليو) 2016

 
 
SCLA